Cílená analýza větvených esterů mastných kyselin pomocí LC/MS

Abstract

Lipidomika je jedna z oblastí metabolomiky, která se v poslední době, díky rozvoji analytických metod, těší velké pozornosti. Tato práce se věnuje optimalizaci extrakce lipidů z biologických vzorků, pre-separaci pomocí extrakce kapalina kapalina, extrakci na pevné fázi, následné separaci a identifikaci větvených esterů hydroxylovaných mastných kyselin (FAHFA - branched-chain Fatty Acid esters of Hydroxy Fatty Acids) pomocí ultra účinné kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií. Tato třída lipidových molekul souvisí se sekrecí insulinu, schopností působit na metabolismus glukosy a poskytuje potenciál v léčbě diabetu druhého typu. Extrakce na pevné fázi byla testována na kolonkách reverzní fáze obsahujících sorbent modifikovaný styren divinylbenzenovým polymerem nebo polymerem s vázaným oktadecylem a silikagelových kolonkách pro normální fázi. Zvolená kolonka Strata SI-1 Silica byla použitapro separaci FAHFA z komplexních biologických vzorků. FAHFA analýza byla optimalizována na sestavě UPLC Ultimate 3000 RSLC vybavené chromatografickou kolonou Kinetex C18 1,7 µm, 2,1 x 150 mm v gradientovém programu. UPLC byla spojena s hmotnostním spektrometrem QTRAP 5500/SelexION pracujícím v nastavení hybridní trojitý kvadrupól/lineární iontová past a přidanou iontovou mobilitní celou....

Lipidomics as a part of metabolomics is a fast-growing area of research due to the improvement in analytical techniques. This master thesis is focused on lipid extraction techniques optimization, using liquid liquid extraction and solid phase extraction as pre-separation methods and ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry for extraction and subsequent identification of branched-chain fatty acid esters (FAHFA - branched-chain Fatty Acid esters of Hydroxy Fatty Acids). This newly discovered class of lipid molecules is associated with insulin secretion, which could improve whole body and local glucose metabolism, providing potential for diabetes 2 type treatment. Solid phase extraction of biological samples was optimized on columns regarding to sorbent composition using reversed phase columns with modified styrene divinylbenzene polymer or octadecyl-bonded polymer and normal phase columns packed with silica gel. Column Strata SI-1 Silica was the most effective for FAHFA separation from biological samples. Chromatographic separation of FAHFA was performed on UPLC Ultimate 3000 RSLC equipped with Kinetex C18 1,7 µm, 2,1 x 150 mm column using gradient program. UPLC was coupled to QTRAP 5500/SelexION, a hybrid, triple quadrupole, linear ion trap mass spectrometer equipped...