Imunochemické stanovení enzymů DHRS8 a DHRS12 v lidských tkáních

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Markéta Svobodová Školitel: RNDr. Eva Novotná, Ph.D. Název diplomové práce: Imunochemické stanovení enzymů DHRS8 a DHRS12 v lidských tkáních Dehydrogenasa/reduktasa (SDR rodiny) člen 8 (DHRS8, SDR16C2) a dehydrogenasa/reduktasa (SDR rodiny) člen 12 (DHRS12, SDR40C1) jsou lidské mikrosomální enzymy, které patří do nadrodiny dehydrogenas/reduktas s krátkým řetězcem (SDR). Tato nadrodina představuje jednu z největších proteinových skupin. SDR enzymy se podílejí na metabolismu různých endogenních a cizorodých látek a jsou zapojeny do fyziologických i patologických procesů. Nicméně, stále existuje mnoho enzymů, které nejsou dostatečně charakterizovány. Doposud jsou k dispozici informace o DHRS8 jen na úrovni mRNA a o její katalytické aktivitě vůči 5α-androstan-3α-17β-diolu. Navíc neexistují dosud publikované informace (kromě predikce) ohledně DHRS12. Cílem této studie bylo prozkoumat expresi DHRS8 a DHRS12 v různých lidských tkáních na úrovni proteinu. Vzorky tkáně byly odebrány od čtyř mužů středního věku po náhlé smrti bez zjevného onemocnění. Detekce proteinů byla provedena pomocí Western blottingu a specifických protilátek. Rekombinantní forma hledaných proteinů (DHRS12, DHRS8) byla exprimována v...

Charles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Markéta Svobodová Supervisor: RNDr. Eva Novotná, Ph.D Title of diploma thesis: Expression of DHRS8 and DHRS12 enzymes in human tissues Dehydrogenase/reductase (SDR family) member 8 (DHRS8, SDR16C2) and dehydrogenase/reductase (SDR family) member 12 (DHRS12, SDR40C1) are human microsomal enzymes belonging to the superfamily of short-chain dehydrogenases/reductases (SDR). This superfamily represents one of the largest protein groups. SDR enzymes participate in the metabolism of various xenobiotic and endogenous compounds and are involved in physiological and pathological processes. However, there are still many enzymes which are only poorly characterised. To this date, the expression on mRNA level and catalytic activity toward 5α- androstane-3α,17β-diol are the only available information about DHRS8. Moreover, there is still no published information (apart from the prediction) regarding DHRS12. The aim of this study was to examine the protein expression of DHRS8 and DHRS12 enzymes in various human tissues. The tissue samples were collected from four middle aged male subjects after the sudden death without apparent disease. Proteins of interest were detected using western blotting and...