Studium proteinů spermií různých savčích druhů

Abstract

Rozmnožování je základní charakteristikou všech zvířat a nezbytným krokem k produkci nové generace. Studium proteinů spermií je rozhodující pro pochopení vzájemného rozpoznání spermie a vajíčka. Zabývali jsme se povrchovými proteiny, které se podílejí na vazbě na zona pellucida a zkoumali, zda jsou tyto proteiny zachovány v rámci savčích druhů. Nepřímá imunofluorescenční mikroskopie byla použita k testování panelu monoklonálních protilátek, které byly připraveny proti povrchovým proteinům spermií prasete, na býčích a myších spermiích. Byla nalezena zkřížená mezidruhová reaktivita některých protilátek proti kančím spermiím na ejakulovaných spermiích býka a na epididymálních spermiích myši. Dále jsme izolovali proteiny spermií různých savčích druhů: prasete, býka, psa, kocoura, myši a člověka. Proteiny byly separovány elektroforeticky v přítomnosti SDS a byly porovnány proteinové a glykoproteinové profily epididymálních, ejakulovaných a in vitro kapacitovaných spermií. Interakce spermií se zona pellucida byly studovány na elektroforeticky separovaných povrchových proteinech spermií prasete a býka reakcí s biotinem- značenými glykoproteiny zona pellucida. Protilátky značící povrchové proteiny kančích spermií se zona pellucida vázající aktivitou byly použity ke sledování původu daného proteinu v...

Reproduction is an essential feature of all animals and a fundamental step to produce new generations. Study of sperm proteins is crucial for understanding of the sperm-egg recognition. We searched out sperm surface proteins involving in the zona pellucida (ZP) binding and studied whether these proteins are preserved throughout mammalian species. Indirect immunofluorescent technique was used to test a panel of monoclonal antibodies prepared against boar sperm surface proteins on spermatozoa of bull and mice. We found a cross-reactivity of some antibodies against boar sperm with bull ejaculated and mouse epididymal spermatozoa. Further, we isolated sperm proteins from different mammalian species, such as pig, bull, dog, cat, mouse and human. Proteins were separated by SDS- electrophoresis and protein/glycoprotein profiles from epididymal, ejaculated and in vitro capacitated sperm were compared. The interaction of sperm with ZP was studied on electrophoretically-separated sperm surface proteins from pig and bull with biotin-labeled ZP glycoproteins. Antibodies, which reacted with boar sperm surface proteins with ZP- binding activity, therefore could be potential egg-binding receptors, were used for monitoring of the sperm protein origin in reproductive fluids and tissues. (In Czech) Keywords: sperm...