Reportérový expresní systém pro studium umlčování integrovaného proviru v transkribované oblasti genu
Reporter expression system for study of silencing of provirus integrated inside transcriptionally active gene
diploma thesis (DEFENDED)
View/ Open
Permanent link
http://hdl.handle.net/20.500.11956/74478Identifiers
Study Information System: 143889
Collections
- Kvalifikační práce [20106]
Author
Advisor
Referee
Španielová, Hana
Faculty / Institute
Faculty of Science
Discipline
Genetics, Molecular Biology and Virology
Department
Department of Genetics and Microbiology
Date of defense
14. 9. 2015
Publisher
Univerzita Karlova, Přírodovědecká fakultaLanguage
Czech
Grade
Very good
Keywords (Czech)
transkripční umlčování, integrace, retroviry, ASLV, HIVKeywords (English)
transcriptional silencing, integration, retroviruses, ASLV, HIVRetrovirové vektory jsou používány jako nástroj vkládání rekombinantních genů do genomu příjemce genové terapie. Při konstrukci takových vektorů je kladen důraz na bezpečnost a účinnost. I přes velké pokroky v konstrukci retrovirových resp. lentivirových vektorů pro genovou terapii za účelem stabilizace jejich exprese, jako vkládání ochranných elementů do virových regulačních sekvencí, nejsou dosavadní přístupy stále dostatečně účinné a většina integrovaných provirů je transkripčně umlčována. Pochopení mechanismu umlčování provirů je tedy kritické pro efektivní manipulaci s retrovirovými vektory a pro optimalizaci jejich struktury. V předkládané magisterské práci navrhuji a vytvářím expresní systém sloužící ke studiu umlčování provirů integrovaných do transkribovaných oblastí genů. Tento arteficiální systém bude později využit k testování hypotézy, že proviry integrované do transkribovaných oblastí genů jsou umlčovány při transkripčním pročtení z hostitelského genomu do provirů mechanismem závislým na aktivitě de novo DNA metyltransferáz. Mnou získané předběžné výsledky naznačují na platnost této hypotézy, ale potvrzení její obecné platnosti bude součástí dalšího studia v laboratoři. Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)
Retroviral vectors are used as mighty tools for an introduction of recombinant genes into the recipient genome in gene therapy trials. In the vector design, great emphasis is put on safety and efficiency. In spite of a great progress in retroviral vector design with the purpose to stabilize its expression, e.g. introduction of protective elements into the viral regulatory sequences, the current approaches are still not sufficiently effective and the majority of proviruses is transcriptionally silenced. The understanding of the silencing mechanism is of special importance to the optimization of the vector design and handling. In this master thesis, I have designed and constructed an expression system for study of the mechanism involved in the silencing of retroviruses integrated inside gene bodies. This artificial system will be utilized for testing of hypothesis that retroviruses integrated into gene bodies are silenced by DNMT-dependent mechanism and this process is triggered by transcriptional read-through of the provirus from nearby host promoter. I have obtained preliminary results suggesting the validity of the suggested hypothesis; however the verification of general validity of this hypothesis for various retroviruses and elements will be a matter of further studies in our laboratory. Powered by...