Studium adenosinových receptorů a jejich signalizace v myokardu potkana

Abstract

Adenosin hraje kritickou roli v srdeční signalizaci, kde ovlivňuje srdeční tep, kontraktilitu nebo krevní oběh. Doposud jsou známy 4 podtypy adenosinových receptorů, které se vyskytují téměř ve všech tkáních a buňkách lidského těla: A1, A2A, A2B a A3. Jedná se o receptory spřažené s G proteiny, které po aktivaci primárně ovlivňují aktivitu adenylylcyklázy a tvorbu druhého posla cAMP. Cílem této diplomové práce byla charakterizace adenosinových receptorů v myokardu potkana, studium jejich distribuce, vazebných vlastností a signalizace. Pomocí metod elektroforézy a Western blottingu byl studován možný rozdíl v expresi jednotlivých receptorových podtypů v levé a pravé komoře. Použitím těchto metod bylo měřeno množství adenosinových receptorů ve frakci lipidových raftů versus solubilní frakci izolované pomocí Tritonu X-100. Výsledky nepotvrdily odlišnou distribuci receptorů v pravé a levé komoře a stejně tak nebyl pozorován přednostní výskyt adenosinových receptorů v lipidových raftech. Vazebné vlastnosti receptorů byly měřeny v saturačních studiích za použití radioaktivně značeného selektivního antagonisty A1 receptoru [H3 ]DPCPX. Koncentrace A1 receptoru se mezi oběma frakcemi signifikantně nelišila, obecně byla nízká, a toto pozorování se shoduje s výsledky Western blottingu. Nakonec byla stanovena...

Adenosine plays a critical role in the heart signalling while affecting heart rate, contractility or coronary flow. Nowadays, four adenosine receptor subtypes are distinguished which are present in most of tissues and cells: A1, A2A, A2B and A3. All these receptors belong to the family of G protein-coupled receptors. Upon activation, their main target is an enzyme adenylyl cyclase which produces an important second messenger cAMP. The main goal of this thesis was characterization of adenosine receptors in the rat myocardium, assessment of their distribution, binding properties and signalling. We examined a possible disparity in receptors distribution between the left and right ventricles using SDS-PAGE electrophoresis and Western blotting. The same methods have been used in studies of adenosine receptor distribution in lipid rafts. Samples of lipid rafts and soluble fraction were prepared using a nonionic detergent Triton X-100. We did not find any evidence of different distribution between the left and right ventricles and our results did not confirm compartmentation of the receptors either. For determination of binding properties of the receptors we used radioligand binding assays with the A1 selective radioligand [H3 ]DPCPX. We did not observe any significant difference between the receptor...