Strukturní biologie komplexu potkaních NK buněčných receptorů NKR-P1B a Clrb

Abstract

NK buňky mají důležitou roli v nespecifické imunitě organismů. Jejich schopností je rozpo- znat a zabít nádorové a virově infikované buňky bez předchozí senzitizace antigenem. Jejich funkce je usměrňována množstvím stimulačních a inhibičních receptorů interagujících s li- gandy na cílové - nádorové či infikované buňce. Tato práce se zabývá přípravou a studiem komplexu potkaního NK buněčného inhibičního receptoru NKR-P1B ("natural killer cell re- ceptor - protein 1B") a jeho ligandu Clrb ("C-type lectin-related ligand b"). Clrb spouští inhibici NKR-P1B, což znamená, že pokud buňka exprimuje Clrb, nebude zničena. Při in- fekci potkaním cytomegalovirem ztrácí buňka ze svého povrchu Clrb a není tedy zabráněno jejímu zničení. Buňky infikované tímto virem se brání zničení pomocí exprese virového genu C-lektinového typu RCTL, jenž je homologem Clrb. Pro rekombinantní přípravu rozpustné formy těchto dvou receptorů potkaních NK bu- něk byla použita tranzientní transfekce linie lidských embryonálních ledvinných buněk 293 s jednoduchou glykosylací (HEK293S GnTI− ). Nativní formy receptorů - disulfidicky vázané homodimery - byly připraveny jako fúzní konstrukty s IgG Fc (s pomocí vektoru pYD5), které po odštěpení TEV proteasou poskytují čistě dimerní formu extracelulární části re- ceptorů bez jakékoliv afinitní...

The Natural Killer (NK) cells have an important role in the nonspecific immunity of the or- ganism. They have the ability to identify and to kill tumor cells and cells infected by a virus without preceding sensitization by antigen. Their function is directed by the amount of sti- mulation and inhibition receptors interacting with ligands on the tumor or infected cell. This thesis focuses on the preparation and the study of the complex of rat NK cellular inhi- bition receptor NKR-P1B ("natural killer cell receptor - protein 1B") and its ligand Clrb ("C-type lectin-related ligand b"). The Clrb initiates the inhibition of NKR-P1B, meaning that if the cell express Clrb, it won't be destroyed. If the cell gets infected by the rat cytome- galovirus, it loses Clrb from its surface and its destruction is therefore no longer prevented. Cells infected with this virus defend themselves from destruction by expression of the viral gene of C-type lectin RCTL, which is a homolog of Clrb. Transient transfection of human embryonic kidney 293 cell line with simple glycosylation (HEK293S GnTI− ) was used for the recombinant preparation of the soluble form of these two receptors of the rat NK cells. The native forms of the receptors - disulfidic homo- dimers - were prepared as the fusion construct with IgG Fc (using...