Show simple item record

Optimization of HEK293 cell line expression system by regulation of cell cycle and apoptosis
dc.contributor.advisorVaněk, Ondřej
dc.creatorPoláchová, Edita
dc.date.accessioned2017-05-27T07:08:29Z
dc.date.available2017-05-27T07:08:29Z
dc.date.issued2014
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/68567
dc.description.abstractTranzientní transfekce savčích buněčných linií je známa jako užitečná technika pro přípravu rekombinantních proteinů, kterou lze získat miligramy až gramy proteinů za pouhé dva týdny od klonování odpovídající cDNA. Takto připravené nativní glykosylované proteiny mohou být využity pro různé účely v molekulární biologii, imunologii či farmaceutickém průmyslu, např. pro počáteční fáze preklinického výzkumu terapeutických proteinů. Jednou z nejvíce používaných hostitelských savčích buněčných linií je v tomto ohledu linie lidských embryonálních ledvinných buněk, kterou lze dobře kultivovat a snadno se chemicky transfekuje. Produkce proteinů v tranzientně transfekovaných lidských embryonálních ledvinných buňkách může být zvýšena celou řadou faktorů, např. koexpresí kyselého růstového faktoru fibroblastu či jeho přídavkem do kultivačního média, anebo koexpresí proteinů regulujících buněčný cyklus či apoptózu. Byl připraven expresní plazmid pTW5, do kterého byl následně vložen gen pro aFGF, regulátor buněčného cyklu p18, p21 či p27 (inhibitory cyklin-dependentních kináz) nebo inhibitor apoptózy bcl-2 či bcl-x. Tyto plazmidy byly využity k optimalizaci expresního systému buněčné linie HEK293T. Za pomoci modelových proteinů - zeleného fluorescenčního proteinu a sekretované alkalické fosfatázy - byl sledován...cs_CZ
dc.description.abstractTransient transfection of mammalian cell lines is an effective approach for recombinant protein production, which can provide milligrams to grams of proteins in two weeks from cloning of the corresponding cDNA. Native glycosylated proteins prepared via this approach can be used for various purposes in molecular biology, immunology or pharmaceutical industry, i.e. initial phase of pre-clinical therapeutic protein research. One of the most used mammalian host cell lines is the human embryonic kidney cell line, that can be easily cultivated and chemically transfected. The amount of proteins produced by transiently transfected human embryonic kidney cells can be enhanced by a whole range of factors, i.e. co-expression or direct addition of acidic fibroblast growth factor to the culture medium, co-expression of cell cycle regulating proteins or anti-apoptotic proteins. Expression plasmid pTW5 was prepared and further modified by gene insertion of aFGF, cell cycle regulator p18, p21 or p27 (cyclin-dependent kinase inhibitors) or apoptosis inhibitor bcl-2 or bcl-x. These plasmids were then used for optimization of HEK293T cell line expression system. The impact of every single regulator and their combinations, including hitherto undescribed effect of combination of cell cycle regulator and anti-apoptotic...en_US
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakultacs_CZ
dc.subjectbuněčný cykluscs_CZ
dc.subjectinhibitor cyklin-dependentní kinázycs_CZ
dc.subjectapoptózacs_CZ
dc.subjectbclcs_CZ
dc.subjectřízená proliferacecs_CZ
dc.subjectrůstový faktorcs_CZ
dc.subjectHEK293cs_CZ
dc.subjectrekombinantní expresecs_CZ
dc.subjecttranzientní transfekcecs_CZ
dc.subjectPEIcs_CZ
dc.subjectcell cycleen_US
dc.subjectcyclin-dependent kinase inhibitoren_US
dc.subjectapoptosisen_US
dc.subjectbclen_US
dc.subjectcontrolled proliferationen_US
dc.subjectgrowth factoren_US
dc.subjectHEK293en_US
dc.subjectrecombinant expressionen_US
dc.subjecttransient transfectionen_US
dc.subjectPEIen_US
dc.titleOptimalizace expresního systému HEK293 buněčné linie pomocí regulace buněčného cyklu a apoptózycs_CZ
dc.typediplomová prácecs_CZ
dcterms.created2014
dcterms.dateAccepted2014-09-15
dc.description.departmentDepartment of Biochemistryen_US
dc.description.departmentKatedra biochemiecs_CZ
dc.description.facultyPřírodovědecká fakultacs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Scienceen_US
dc.identifier.repId130131
dc.title.translatedOptimization of HEK293 cell line expression system by regulation of cell cycle and apoptosisen_US
dc.contributor.refereePavlíček, Jiří
dc.identifier.aleph001864389
thesis.degree.nameMgr.
thesis.degree.levelnavazující magisterskécs_CZ
thesis.degree.disciplineKlinická a toxikologická analýzacs_CZ
thesis.degree.disciplineClinical and Toxicological Analysisen_US
thesis.degree.programKlinická a toxikologická analýzacs_CZ
thesis.degree.programClinical and Toxicological Analysisen_US
uk.thesis.typediplomová prácecs_CZ
uk.taxonomy.organization-csPřírodovědecká fakulta::Katedra biochemiecs_CZ
uk.taxonomy.organization-enFaculty of Science::Department of Biochemistryen_US
uk.faculty-name.csPřírodovědecká fakultacs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Scienceen_US
uk.faculty-abbr.csPřFcs_CZ
uk.degree-discipline.csKlinická a toxikologická analýzacs_CZ
uk.degree-discipline.enClinical and Toxicological Analysisen_US
uk.degree-program.csKlinická a toxikologická analýzacs_CZ
uk.degree-program.enClinical and Toxicological Analysisen_US
thesis.grade.csVýborněcs_CZ
thesis.grade.enExcellenten_US
uk.abstract.csTranzientní transfekce savčích buněčných linií je známa jako užitečná technika pro přípravu rekombinantních proteinů, kterou lze získat miligramy až gramy proteinů za pouhé dva týdny od klonování odpovídající cDNA. Takto připravené nativní glykosylované proteiny mohou být využity pro různé účely v molekulární biologii, imunologii či farmaceutickém průmyslu, např. pro počáteční fáze preklinického výzkumu terapeutických proteinů. Jednou z nejvíce používaných hostitelských savčích buněčných linií je v tomto ohledu linie lidských embryonálních ledvinných buněk, kterou lze dobře kultivovat a snadno se chemicky transfekuje. Produkce proteinů v tranzientně transfekovaných lidských embryonálních ledvinných buňkách může být zvýšena celou řadou faktorů, např. koexpresí kyselého růstového faktoru fibroblastu či jeho přídavkem do kultivačního média, anebo koexpresí proteinů regulujících buněčný cyklus či apoptózu. Byl připraven expresní plazmid pTW5, do kterého byl následně vložen gen pro aFGF, regulátor buněčného cyklu p18, p21 či p27 (inhibitory cyklin-dependentních kináz) nebo inhibitor apoptózy bcl-2 či bcl-x. Tyto plazmidy byly využity k optimalizaci expresního systému buněčné linie HEK293T. Za pomoci modelových proteinů - zeleného fluorescenčního proteinu a sekretované alkalické fosfatázy - byl sledován...cs_CZ
uk.abstract.enTransient transfection of mammalian cell lines is an effective approach for recombinant protein production, which can provide milligrams to grams of proteins in two weeks from cloning of the corresponding cDNA. Native glycosylated proteins prepared via this approach can be used for various purposes in molecular biology, immunology or pharmaceutical industry, i.e. initial phase of pre-clinical therapeutic protein research. One of the most used mammalian host cell lines is the human embryonic kidney cell line, that can be easily cultivated and chemically transfected. The amount of proteins produced by transiently transfected human embryonic kidney cells can be enhanced by a whole range of factors, i.e. co-expression or direct addition of acidic fibroblast growth factor to the culture medium, co-expression of cell cycle regulating proteins or anti-apoptotic proteins. Expression plasmid pTW5 was prepared and further modified by gene insertion of aFGF, cell cycle regulator p18, p21 or p27 (cyclin-dependent kinase inhibitors) or apoptosis inhibitor bcl-2 or bcl-x. These plasmids were then used for optimization of HEK293T cell line expression system. The impact of every single regulator and their combinations, including hitherto undescribed effect of combination of cell cycle regulator and anti-apoptotic...en_US
uk.file-availabilityV
uk.publication.placePrahacs_CZ
uk.grantorUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra biochemiecs_CZ


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV