Vývoj bioanalytické metody pro stanovení nových potenciálních léčiv odvozených od thiosemikarbazonu v biologickém materiálu

Abstract

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie se vzhledem k vysoké citlivosti a selektivitě v současnosti řadí mezi nejpoužívanější analytické metody stanovování obsahu léčiv v biologickém materiálu. Je vhodná jak pro kvantitativní, tak pro kvalitativní analýzu. 2-benzoylpyridin-4-ethyl-3-thiosemikarbazon (Bp4eT) je potenciálním léčivem ze skupiny thiosemikarbazonů, které jsou v dnešní době intenzivně studována a vyvíjena jako protinádorová léčiva. Jejich specifický mechanismus účinku, který je založen na chelataci železa, může výrazně přispět k léčbě nádorů rezistentních vůči standardní chemoterapii. Cílem této práce bylo vyvinout a ověřit základní validační parametry HPLC- MS/MS metody pro stanovení Bp4eT včetně jeho hlavních metabolitů v potkaní plazmě a využít ji pro analýzu vzorků z pilotní farmakokinetické studie na potkanech. Separace Bp4eT a jeho metabolitů bylo dosaženo na chromatografické koloně Discovery HS C18 (75 x 4,6 mm, 3 µm) chráněné stejným typem předkolony s použitím mobilní fáze skládající se z 2mM mravenčanu amonného a acetonitrilu v poměru 40:60 (v/v). Byla využita izokratická eluce při průtoku mobilní fáze 0,4 ml/min. Jako detektor byl využit hmotnostní spektrometr, přičemž kvantifikace probíhala v SRM módu. Vzorky plazmy byly upraveny pomocí SPE. Metoda byla úspěšně zvalidována a...

Nowadays, high-performance liquid chromatography is widely used analytical method for separation and quantification of drugs in biological material due to its high sensitivity and selectivity. HPLC is suitable for quantitative as well as qualitative analysis. 2-benzoylpyridine-4-ethyl-3-thiosemicarbazone (Bp4eT) is a potential drug from the group of thiosemicarbazones, which are currently intensively studied and developed as anticancer agents. Their specific mechanism of action, based on chelation of iron, might overcome resistance to standard chemotherapy. The aim of this study was to develop and assess essential validation parameters of an HPLC-MS/MS method for determination of Bp4eT and its main phase I metabolites in rat plasma and to utilise the method for the analysis of samples from a pilot pharmacokinetic study in rats. The separation of Bp4eT and its metabolites was achieved on chromatographic column Discovery HSC18 (75 x 4.6 mm, 3 µm) protected by the same type of guard column using the mobile phase consisting of ammonium formate and acetonitrile in ratio 40:60 (v/v). The isocratic elution and the flow rate of 0.4 ml/min were utilised. Mass spectrometer was chosen as a detector and the quantification was performed in selected reaction monitoring mode. Plasma samples were treated using the...