Úloha proteinů CIDE při apoptóze a morfologie mitochondriální sítě v patogeneze

Abstract

Cď deďh-indrcing DFFIDNA fragmentationfactor]-likeeffector-a(CIDEa)' may initiďe 4optosis by disruptinga complex consisting of 40-kDa caspase-3-aďvďed nucleaseDFF40 md its 45.kDa inhibitor DFF45. We measured Íhe levels of mRNA CIDEa in rattus norvegicus tissues and deteďed high lwels of RNA in white aďpose tiszue. We have confirmedthepresenceof CIDEa in mitoohon&ia andimportanceof CIDE-C domain for this localization. We havealso performedimmrrnodetectionof subcellular&actionsofHela cells adapted for a tetracycline-inducible CIDEa expression. We have observed redistribution, enhancedupon treatuotrt with camptothecinor valinomycin, of CIDEa to nucleus. CIDEa contentincreasď in the nuclear fractionbut decreasedin oýosolio fraction in cells heatedto initiaÍe4optosis. We hypothesizethatCIDEa is sequesteredin mitochondriawhile transferof this pote,ntiallydangerousprotein from mitochondriainto nucleusintensifies or even initiates apoptosis. Mitochondria in nrrmerouscell types,especiďly in culturedcells, form a reticula network undergoing constant fusion and fission. The tbree dimensionď (3D) morphology of these networks however has not been stuďed in detail to our knowledge. We have investigated insďinoma INS-IE and hepatocellular oarcinoma HEP-G2 cells hansGoted \Yith mitoohondria-addressedGFP. Using 4Pi...

Souhrn CIDEa (Cell death-inducingDFFIDNA fiagmentationfactor].likeeffector.a)je protein,ktenýmuže iniciovat apoptózuskze narušeníheterodimeríckéhoproteinuDFF, sloŽenéhoz nukleáayDFF40, kteroualdivuje kaspáza3 ajejiho inhibitoruDFF45. Měřili jsme hladiny mRNA CiDEa v tkáních laboratorníhopotkana a detekovalj tento protein ve lysohých hladinách v bílétukovétkani. Potvrdili jsme také přítomnost proteinu CIDEa v mrtochondriícha důležitostjeho CIDE-C doménypro tuto lokalizaci. Ukiízalo se, že mýšenáexpreseproteinuCIDEa vedla kapoptóze' Dále jsme provedli imunodetekci buněčnýchfrakcí HeLa buněk upravenýchna tetracyklinem indukovanou expresi. Po inkubací s campthotecinemnebo valinomycinem jsme s]edovali redistribuciproteinu CIDEa do jádra. Předpokládáme,žeCIDEa se nacházív mitochondriícha jejítransportdojádra můžezesílitneboiniciovat mechanismusapoptóZy' Mitochondrietvořív buňkáchretikularnistruktury,kterékontinuálněprocháaejíprocesyfúzea fragnentace. Doposud provedenétrojrozměméanalýzy mítochondriíale nepopsaly detaílně jejich strukturu' Analyzovali jsme mitochondriální síťu buněčnýchlinii INSIE a }iEPG2 traďekovaných mitochondriálněadresovanýmGFP. Pomocí4Pi mikoskopie se mohou sledovat přesnézměny v 3D struktuře, odpovídajícízměnám energetickýchstavův buňkách' a to při rozlišeníl00nm. Mitochondrie INSlE buněkza...