Expression and function of molecules of innate system in embryonal phagocytes

Abstract

(CZ) Embryonální fagocyty představují směs myeloidních buněk, které se liší od linie dospělých makrofágů svým původem, fenotypem a biochemicky. Ukazuje se, že embryo je postupně osidlováno nejméně třemi populacemi makrofágů: první z nich pochází od matky a následující dvě z extraembryonálního žloutkového váčku. Prokázán je také výskyt raných embryonálních fagocytů u evolučně rozdílných druhů v hlavovém mezodermu, jejichž původ není doposud objasněn. Různorodost embryonálních fagocytů ve spojení s nedostatkem jejich specifických markerů neumožnuje rozlišovat tyto buňky na základě fenotypu a znesnadňuje studium jejich potenciálně rozdílných fyziologických funkcí v embryonálním vývoji. Cílem této práce je identifikovat nové markery vhodné pro fenotypovou charakterizaci embryonálních fagocytů. Pomocí analýzy qRT-PCR jsme stanovili kinetiku exprese receptorů skupiny Toll (TLRs) a jejich adaptérových proteinů obsahujících TIR doménu v průběhu rané embryogeneze (E7,5-E12,5) a prokázali jsme, že jsou produkovány fagocytickými buňkami. Pomocí imunohistochemie na celém embryu jsme taktéž prokázali, že Sigirr, negativní regulátor TLR signalizace, je rovnoměrně exprimován v embryonálních tkáních během raného vývoje. Přibližně 0,7-1% buněk v embryu starém 10,5 dne tvoří makrofágy charakterizované povrchovou...

Phagocytes of an early embryo represent a mixture of myeloid lineages that differ from adult macrophages phenotypically, biochemically and by their origin. Recent studies suggested that there are at least three waves of macrophages populating the early embryo: a maternally- derived one and two waves of extraembryonic, YS-derived origin. In addition, the occurence of early embryonic phagocytes of undetermined origin in developing anterior head mesoderm in evolutionary distinct species is well documented. This origin-related heterogeneity among early embryonic phagocyte subpopulations coupled with the lack of specific markers makes it difficult to distinguish them phenotypically and study their potentially distinct physiological roles in early development. The aim of this study is to identify and characterize a set of novel markers suitable for identification of embryonic phagocytes. Here, using qRT-PCR approach, we have established the kinetics of expression of Toll like receptors (TLRs) and their TIR-domain containing adaptors during early embryogenesis (E7.5-E12.5) and demonstrate that their major cellular source are indeed phagocytes. Using whole-mount embryo immunohistochemistry we also show that negative regulator of TLR signaling Sigirr is expressed during very early stages of mouse...