Porovnání původní Ellmanovy metody a její modifikace s použitím readeru mikrotitračních destiček

Abstract

Morávková, Martina. Porovnání původní Ellmanovy metody a její modifikace s použitím readeru mikrotitračních destiček. Diplomová práce 2015. Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra farmaceutické botaniky a ekologie. Vedoucí práce: Ing. Kateřina Macáková, Ph.D. Klíčová slova: Ellmanova metoda, acetylcholinesteráza, butyrylcholinesteráza, spektrofotometr, reader mikrotitračních destiček. Ellmanova metoda je často využívaným postupem při měření inhibice cholinesteráz acetylcholinesterázy (AChE) a butyrylcholinesterázy (BuChE). Princip je založený na hydrolýze acetylthiocholinu a butyrylthiocholinu cholinesterázami za vzniku příslušné kyseliny a thiocholinu. Množství thiocholinu je stanoveno spektroforometricky pomocí reakce s 5,5'- dithiobis-2-nitrobenzoovou kyselinou. V této práci byly porovnány výsledky měření ze dvou různých přístrojů (spektrofotometr a reader mikrotitračních destiček) a při různých teplotách (laboratorní teplota a teplota 37 řC). Pro porovnání byly zvoleny látky s různou mírou inhibice obou enzymů: allokryptopin, kalifornidin jodid, eserin, galantamin, huperzin A a tazettin. U kalifornidin jodidu (AChE, BuChE), eserinu (BuChE) a huperzinu A (AChE) byly zaznamenány statisticky významné rozdíly při měření na různých přístrojích a za různých podmínek. Obecně...

Morávková, Martina. Comparison of original Ellman's method and its modification using microplate reader. Diploma thesis 2015. Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Pharmaceutical Botany and Ecology. Supervisor: Ing. Kateřina Macáková, Ph.D. Key words: Ellman's method, acetylcholinesterase, butyrylcholinesterase, spectrophotometer, microplate reader. Ellman's method is often used procedure for measuring an inhibition of cholinesterases acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BuChE). The principle is based on hydrolysis of acetylthiocholiniodide and butyrylthiocholiniodide to give an appropriate acid and thiocholine. Amount of thiocholine is determined spectrophotometrically by reaction with 5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic acid. Results of measurement from two different devices (spectrophotometer and microplate reader) and at two different temperatures (room temperature and 37 řC) were compared in this thesis. Substances with different amount of inhibition of both enzymes were chosen: allocryptopine, californidine iodide, eserine, galanthamine, huperzine A and tazettine. For californidine iodide (AChE, BuChE), eserine (BuChE) and huperzine A (AChE) were detected statistically significant differences during measurement on different devices and at...