Liquid chromatography methods for analysis of microbial secondary metabolites of bioactive nature

Abstract

(CZ) Tato disertační práce je zaměřena na vývoj nových analytických metod sestávajících z extrakce tuhou fází (SPE) použité pro purifikaci a zkoncentrování analytů a jejich stanovení pomocí ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie (UHPLC) s detektorem diodového pole (DAD) a/nebo hmotnostní detekcí za použití analyzátoru doby letu (ToFMS). Většina předkládaných výsledků byla publikována v prestižních mezinárodních časopisech. Součástí práce jsou také významná dosud nepublikovaná data. Kromě modelových srovnání různých typů kolonových materiálů pro ultra-vysokoúčinné separace představuje práce také významné aplikace vyvinutých metod. Zatímco první část práce je věnovaná stanovení antibiotik jakožto kontaminantů životního prostředí zodpovědných za vývoj a šíření bakteriální rezistence, druhá část se věnuje analýze a hledání biologicky aktivních sekundárních metabolitů z přírodních zdrojů, které mohou být v budoucnu využity jako nová antibiotika. První část disertační práce je zaměřena na stanovení reziduálních antibiotik v různých matricích (prasečí mrva, odpadní voda, povrchová voda). Jako analyty byla vybrána nejpoužívanější humánní a veterinární antibiotika. Metody sestávající z UHPLC-DAD a UHPLC-ToFMS a dále z SPE nebo extrakce kapalina-kapalina (LLE) byly validovány a pro kvantifikaci byly...

(EN) This work is focused on development of new analytical methods involving modern solid phase extraction (SPE) for sample purification and pre-concentration, state-of-art ultra high- performance liquid chromatography (UHPLC) for separation of analytes and detection using diode-array detection (DAD) and/or time-of-flight mass spectrometry (ToFMS). The major part of the results has been published in prestigious international journals. The relevant yet unpublished results are included in the thesis as well. Besides a model comparison of various column chemistries used for "ultra-high performance" separations, some meaningful applications were developed. While one part of applications deal with determination of antibiotics as environmental contaminants that are responsible for the development and spread of microbial resistance, the second part is concerned with analyzing and finding of potential natural source of novel antimicrobial agents that can be further used as new antibiotics. The first part of the thesis was focused on the determination of residual antibiotics in different matrices (liquid hog manure, wastewater, surface water). The mostly prescribed antibiotics in both human and veterinary medicine were chosen as analytes in this study employing analytical methods consisting of UHPLC-DAD and...