Show simple item record

Purification and characterization of membrane-bounded reductases from human liver
dc.contributor.advisorWsól, Vladimír
dc.creatorPelcová, Vendula
dc.date.accessioned2017-03-29T13:54:55Z
dc.date.available2017-03-29T13:54:55Z
dc.date.issued2006
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/5979
dc.description.abstractCharles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Mgr. Vendula Pelcová Supervisor: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Title of rigorous thesis: Purification and characterization of membrane-bound reductase from human liver. This study was focused on implementation of experimental techniques for purification of human liver microsomal fraction. There were chosen three basic steps of purification process. As a first step, ion-exchange chromatography was chosen followed by two purification steps on the base of gel filtration. Before purification the microsomal fraction had to be solubilized to release proteins from membrane bounds and conditions had to be optimized. Single fractions were subsequently incubated with specific substrate of reductases oracin and the quantity of metabolite 11-dihydroracin was assessed by achiral HPLC analysis. For the most active fractions the SDS-PAGE analysis was done to set size of unknown enzyme. By use of antibody against 11beta-HSD1 was axcleded the presence of this reductase in all analyses fractions. By use of described purification techniques we were successful to concentrate fraction with unknown human liver reductase.en_US
dc.description.abstractUniverzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Vendula Pelcová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název rigorózní práce: Purifikace a charakterizace membránově vázané reduktasy z lidské jaterní tkáně. Tato práce byla zaměřena na zavedení experimentálních technik pro purifikaci lidské jaterní mikrosomální frakce. Byly zvoleny tři základní kroky purifikačního schématu. Jako první krok byla zařazena iontově výměnná chromatografie na silném anexu následována dvěma separacemi na koloně pro gelovou filtraci. Před purifikací bylo nutno mikrosomální frakci solubilizovat, aby se uvolnily proteiny z vazby na membránu a podmínky optimalizovat. Jednotlivé najímané frakce byly následně inkubovány se specifickým substrátem reduktas oracinem a množství vzniklého metabolitu 11-dihydrooracinu bylo stanoveno pomocí achirální HPLC analýzy. U nejaktivnějších frakcí byla provedena SDS- PAGE a určena velikost hledaného enzymu. Použitím protilátky na 11beta-HSD1 byla vyloučena přítomnost této reduktasy v analyzovaných frakcích. S využitím popsaných purifikačních technik se podařilo zakoncentrovat frakci s dosud nepopsanou lidskou jaterní reduktasou.cs_CZ
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Královécs_CZ
dc.titlePurifikace a charakterizace membránově vázané reduktasy z lidské jaterní tkáněcs_CZ
dc.typediplomová prácecs_CZ
dcterms.created2006
dcterms.dateAccepted2006-06-01
dc.description.departmentKatedra biochemických vědcs_CZ
dc.description.departmentDepartment of Biochemical Sciencesen_US
dc.description.facultyFarmaceutická fakulta v Hradci Královécs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Pharmacy in Hradec Královéen_US
dc.identifier.repId17377
dc.title.translatedPurification and characterization of membrane-bounded reductases from human liveren_US
dc.contributor.refereeKvasničková, Eva
dc.identifier.aleph000577429
thesis.degree.nameMgr.
thesis.degree.levelmagisterskécs_CZ
thesis.degree.disciplinePharmacyen_US
thesis.degree.disciplineFarmaciecs_CZ
thesis.degree.programPharmacyen_US
thesis.degree.programFarmaciecs_CZ
uk.thesis.typediplomová prácecs_CZ
uk.taxonomy.organization-csFarmaceutická fakulta v Hradci Králové::Katedra biochemických vědcs_CZ
uk.taxonomy.organization-enFaculty of Pharmacy in Hradec Králové::Department of Biochemical Sciencesen_US
uk.faculty-name.csFarmaceutická fakulta v Hradci Královécs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Pharmacy in Hradec Královéen_US
uk.faculty-abbr.csFaFcs_CZ
uk.degree-discipline.csFarmaciecs_CZ
uk.degree-discipline.enPharmacyen_US
uk.degree-program.csFarmaciecs_CZ
uk.degree-program.enPharmacyen_US
thesis.grade.csVýborněcs_CZ
thesis.grade.enExcellenten_US
uk.abstract.csUniverzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Mgr. Vendula Pelcová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název rigorózní práce: Purifikace a charakterizace membránově vázané reduktasy z lidské jaterní tkáně. Tato práce byla zaměřena na zavedení experimentálních technik pro purifikaci lidské jaterní mikrosomální frakce. Byly zvoleny tři základní kroky purifikačního schématu. Jako první krok byla zařazena iontově výměnná chromatografie na silném anexu následována dvěma separacemi na koloně pro gelovou filtraci. Před purifikací bylo nutno mikrosomální frakci solubilizovat, aby se uvolnily proteiny z vazby na membránu a podmínky optimalizovat. Jednotlivé najímané frakce byly následně inkubovány se specifickým substrátem reduktas oracinem a množství vzniklého metabolitu 11-dihydrooracinu bylo stanoveno pomocí achirální HPLC analýzy. U nejaktivnějších frakcí byla provedena SDS- PAGE a určena velikost hledaného enzymu. Použitím protilátky na 11beta-HSD1 byla vyloučena přítomnost této reduktasy v analyzovaných frakcích. S využitím popsaných purifikačních technik se podařilo zakoncentrovat frakci s dosud nepopsanou lidskou jaterní reduktasou.cs_CZ
uk.abstract.enCharles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Mgr. Vendula Pelcová Supervisor: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Title of rigorous thesis: Purification and characterization of membrane-bound reductase from human liver. This study was focused on implementation of experimental techniques for purification of human liver microsomal fraction. There were chosen three basic steps of purification process. As a first step, ion-exchange chromatography was chosen followed by two purification steps on the base of gel filtration. Before purification the microsomal fraction had to be solubilized to release proteins from membrane bounds and conditions had to be optimized. Single fractions were subsequently incubated with specific substrate of reductases oracin and the quantity of metabolite 11-dihydroracin was assessed by achiral HPLC analysis. For the most active fractions the SDS-PAGE analysis was done to set size of unknown enzyme. By use of antibody against 11beta-HSD1 was axcleded the presence of this reductase in all analyses fractions. By use of described purification techniques we were successful to concentrate fraction with unknown human liver reductase.en_US
uk.publication.placeHradec Královécs_CZ
uk.grantorUniverzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biochemických vědcs_CZ


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV