Studium biologicky aktivních sekundárních metabolitů produkovaných vybraným kmenem hub rodu Geosmithia metodou UPLC-DAD-TOF-MS

Abstract

(CZ) Tato práce se zabývá studiem kmenu hub RJ0258 (Geosmithia sp.9), u kterého byla dříve zjištěna produkce sekundárních metabolitů s antimikrobiální aktivitou. Produkce sekundárních metabolitů je značně závislá na kultivačních podmínkách a následné získávání těchto metabolitů na typu použité extrakční metody. Práce zahrnuje optimalizaci kultivačních podmínek houbové kultury pro zajištění maximální produkce látek s antimikrobiální aktivitou, následné zpracování fermentačního média, metodiku extrakce těchto biologicky aktivních látek a jejich separaci kapalinovou chromatografií. Při provedených testech bylo zjištěno optimální složení kultivačního média - agar s maltózovým extraktem (MEA - 100 ml, maltózový extrakt - 2 g, glukosa - 2 g, pepton 0,1 g, úprava pH na 5-6). Dále bylo zjištěno, že nejvhodnější doba kultivace je 11 dní od počátku kultivace, kdy dochází na základě testů biologické aktivity k největší produkci sekundárních metabolitů s antimikrobiální aktivitou. Po kultivaci bylo fermentační médium extrahováno metodou kapalina-kapalina roztokem 5% kyseliny octové v ethylacetátu. Po odpaření a rozpuštění získaného extraktu byl extrakt analyzován metodou UPLC-DAD-TOF-MS. Analýzy probíhaly na koloně Acquity UPLC BEH C18 a extrakt byl separován za použití lineární gradientové eluce s mobilními...

(EN) This work is dealing with study of fungal strain RJ0258 (Geosmithia sp.9) which was previously found to be the producer of secondary metabolites with antimicrobial activity. Production of secondary metabolites is significantly dependent on the conditions of cultivation and the subsequent gaining of these metabolites depends on the extraction method as well. This thesis involves the optimization of the cultivation conditions for fungal culture to ensure maximum production of substances with antimicrobial activity, the subsequent treatment of the fermentation medium, the extraction procedure focused on biologically active substances and finally the chromatographic separation. The most suitable design of the fermentation broth was chosen based on the tests - Malt extract agar medium (MEA - 100 ml, malt extract - 2 g, glucose - 2 g, pepton 0,1 g, pH adjusted to 5-6). Moreover, it was found out, that the optimal time of cultivation is 11 days, because, according to the test of biological activity, there is the highest production of secondary metabolites with antimicrobial activity. Following cultivation, the fermentation medium was extracted liquid-liquid extraction employing solution of 5% acetic acid in ethyl acetate. After evaporation and dissolution of the extract the obtained extract was...