Vývoj MEPS metody pro UHPLC-MS/MS stanovení entekaviru v ultrafiltrátu ledvin

Abstract

1 Abstrakt Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jaroslav Janák Školitel: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Název diplomové práce: Vývoj MEPS metody pro UHPLC-MS/MS stanovení entekaviru v ultrafiltrátu ledvin Diplomová práce se zabývala vývojem a validací metody úpravy vzorků pro stanovení entekaviru v ultrafiltrátu ledvin, pomocí techniky MEPS, tj. mikroextrakce tuhým sorbentem. K analýze byla využita již dříve vyvinutá UHPLC-MS/MS metoda pro stanovení entekaviru v potkaní moči. Pro jeho stanovení byla využita hydrofilní interakční chromatografie na koloně Acquity BEH Amide za použití izokratické eluce. Složení mobilní fáze acetonitril - 5 mM octan amonný pH 4,0 bylo v poměru 75:25 (v:v). Jako vnitřní standard byl použit entekavir C2 13 N15 . Ionizace analytu byla provedena elektrosprejem v pozitivním módu a jako detektor byl zvolen trojitý kvadrupól. Ke kvantifikaci analytu bylo využito SRM přechodů entekaviru a vnitřního standardu. Na základě optimalizace MEPS metody byl jako nejvhodnější tuhá fáze zvolen porézní grafitický uhlík vhodný pro analýzu polárních látek. Jako eluční činidlo byl zvolen roztok acetonitril a vody v poměru 75:25 (v:v) a jako promývací činidlo čistá voda. Metoda byla validována. Ověřena byla zejména linearita, přesnost,...

1 Abstract Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of analytical chemistry Candidate: Jaroslav Janák Supervisor: RNDr. Hana Vlčková, Ph.D. Title of Thesis: Development of MEPS-UHPLC-MS/MS methods for the determination of entecavir in kidney ultrafiltrate. The thesis deals with the development and validation of sample preparation method for determination of entecavir in kidney ultrafiltrate, using techniques MEPS (microextraction by packed sorbent). The previously developed UHPLC-MS/MS method for the determination of entecavir in rat urine has been used for the analysis. Hydrophilic interaction chromatography by column Acquity BEH Amide and isocratic elution were employed. The composition of the mobile phase was acetonitrile and 5 mM ammonium acetate pH 4.0 in the ratio 75:25 (v:v). Entecavir C2 13 N15 was used as the internal standard. Ionization of the analyte was carried out by electrospray in the positive ion mode and triple quadrupole was employed as the detector. Quantification of the analyte was realized by two SRM transitions of entecavir and internal standard method. Based on the MEPS optimization method, porous graphitic carbon suitable for the analysis of polar compounds was selected as the most suitable sorbent. The mixture of acetonitrile and water in a...