Příprava expresního konstruktu receptoru NKp44

Abstract

NK buňky jsou součástí vrozeného imunitního systému. Jejich okamžitá reakce na patogen hraje roli hlavně při eliminaci nádorových či virem napadených buněk. V poslední době jsou NK buňky stále více předmětem různých studií, a to zejména různé formy jejich receptorů. Jednou skupinou receptorů NK buněk jsou receptory přirozené cytotoxicity (NCR), kam kromě dalších dvou členů patří také receptor NKp44. Receptory NCR hrají důležitou roli při aktivaci NK buněk. Receptor NKp44 je označován jako první receptor, který je specifický jen pro aktivované NK buňky. Ligandy receptoru NKp44 nejsou dosud zcela známé. Nedávný výzkum poukázal na jeden z možných ligandů, a to na protein PCNA, který překvapivě prostřednictvím tohoto receptoru působí inhibičně na funkce NK buňky. Cílem této práce bylo získat konstrukt kódující extracelulární část lidského receptoru NKp44. Byla provedena izolace RNA z buněčné linie NK-92MI, z níž byl následně pomocí PCR reakcí získán inzert DNA. Ten byl poté nejdříve ligován do klonovacího pBS vektoru a nakonec do produkčního pET vektoru. Ve výsledku byl tedy získán vektor pro expresi extracelulární části receptoru NKp44.

NK cells are part of the innate immune system. Their immediate response to pathogen plays a role mainly in the elimination of tumor or virus-infected cells. Recently, NK cells, especially their receptors, are increasingly the subject of various studies. One group of NK cell receptors are known as natural cytotoxicity receptors (NCRs). Nowadays three receptors are belonging to this group, one of them is NKp44. NCR receptors play important role in the activation of NK cells. NKp44 is considered as the first specific receptor for activated NK cells. Its ligands are not yet fully known. Recent research has highlighted one of the potential ligands, the protein PCNA, which surprisingly causes inhibition of NK cell function. The aim of this thesis was to prepare plasmid encoding the extracellular part of the human receptor NKp44. DNA insert was obtained by RT-PCR reaction from isolated NK- 92MI cell line RNA. Subsequently it was ligated into the cloning vector pBSSK(+) and then into production pET30-a(+) vector, resulting in the plasmid for expression of the extacellular portion of NKp44.