Show simple item record

Preparation and characterization of binding partners of phosducin.
dc.contributor.advisorObšil, Tomáš
dc.creatorKylarová, Salome
dc.date.accessioned2017-05-16T06:42:33Z
dc.date.available2017-05-16T06:42:33Z
dc.date.issued2013
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/55355
dc.description.abstractAABBSSTTRRAAKKTT Fosducin (Pdc) je vysoce konzervativní fosfoprotein, který hraje důležitou roli v regulaci G- proteinové signalizace ve fotoreceptorových buňkách sítnice. Jeho funkce spočívá ve vazbě Gtβγ dimeru G-proteinu transducinu, čímž dochází k poklesu množství dostupného transducinu a modulaci signálu. Funkce fosducinu je negativně regulována prostřednictvím fosforylace a následné interakce s proteinem 14-3-3. Přestože je mechanismus této regulace již do jisté míry znám, narůstá zájem o poznání jeho dalších interakčních partnerů, jmenovitě SUG1 a CRX. SUG1 je podjednotka 26S proteasomu, která zajišťuje mnoho biologických funkcí, zejména pak degradaci mnoha transkripčních faktorů. Jeho úloha v regulační dráze fosducinu není stále dostatečně prozkoumána, ale pravděpodobně se podílí na transportu fosducinu do proteasomu k jeho degradaci. Pro bližší studium tohoto proteinu byly připraveny a testovány jeho čtyři různé expresní konstrukty pro nalezení optimálních podmínek pro jeho expresi a purifikaci. Výsledky těchto purifikací naznačily, že SUG1 vytváří stabilní a velmi dobře rozpustné vysokomolekulární oligomery. Tyto domněnky byly následně potvrzeny měřením dynamického rozptylu světla a analytickou ultracentrifugací. Jeho chování je však plně v souladu s jeho dobře prozkoumaným archeálním homologem,...cs_CZ
dc.description.abstractAABBSSTTRRAACCTT Phosducin (Pdc) is a highly conserved acidic phosphoprotein, which plays an important role in the regulation of G-protein signalization in intact retina. It binds to Gβγ dimer of heterotrimeric G-protein transducin thereby decreases the pool of available transducin resulting in modulation of signal. Function of phosducin is negatively regulated by its phosphorylation followed by interaction with the 14-3-3 protein. Besides this established way of regulation, we were interested in other putative interaction partners of phosducin, like SUG1 and CRX. SUG1 is a subunit of 26S proteasome with a large scale of biological functions, especially a degradation of many transription factors. Its role in regulation of phosducin is still unclear, but is probably involved in targeting of phosducin to 26S proteasome for its degradation. Subsequently, we prepared four different expression constructs of full-length protein in order to find the best expression and purification strategy. These results suggest that all purified fusion proteins of SUG1 form stable and soluble high molecular weight oligomers. This behaviour was confirmed by dynamic light scattering and analytical ultracentrifugation measurements. In addition, this observation is consistent with previous studies of its bacterial counterpart, PAN...en_US
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakultacs_CZ
dc.subjectfosducincs_CZ
dc.subjectSUG1cs_CZ
dc.subject26S proteasomcs_CZ
dc.subjectCRXcs_CZ
dc.subjectexprese a purifikacecs_CZ
dc.subjectrozptyl světlacs_CZ
dc.subjectphosducinen_US
dc.subjectSUG1en_US
dc.subject26S proteasomeen_US
dc.subjectCRXen_US
dc.subjectexpression and purificationen_US
dc.subjectlight scatteringen_US
dc.titlePříprava a charakterizace vazebných partnerů fosducinu.cs_CZ
dc.typediplomová prácecs_CZ
dcterms.created2013
dcterms.dateAccepted2013-05-28
dc.description.departmentDepartment of Physical and Macromolecular Chemistryen_US
dc.description.departmentKatedra fyzikální a makromol. chemiecs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Scienceen_US
dc.description.facultyPřírodovědecká fakultacs_CZ
dc.identifier.repId117109
dc.title.translatedPreparation and characterization of binding partners of phosducin.en_US
dc.contributor.refereeTeisinger, Jan
dc.identifier.aleph001604061
thesis.degree.nameMgr.
thesis.degree.levelnavazující magisterskécs_CZ
thesis.degree.disciplineBiophysical Chemistryen_US
thesis.degree.disciplineBiofyzikální chemiecs_CZ
thesis.degree.programChemiecs_CZ
thesis.degree.programChemistryen_US
uk.faculty-name.csPřírodovědecká fakultacs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Scienceen_US
uk.faculty-abbr.csPřFcs_CZ
uk.degree-discipline.csBiofyzikální chemiecs_CZ
uk.degree-discipline.enBiophysical Chemistryen_US
uk.degree-program.csChemiecs_CZ
uk.degree-program.enChemistryen_US
thesis.grade.csVýborněcs_CZ
thesis.grade.enExcellenten_US
uk.abstract.csAABBSSTTRRAAKKTT Fosducin (Pdc) je vysoce konzervativní fosfoprotein, který hraje důležitou roli v regulaci G- proteinové signalizace ve fotoreceptorových buňkách sítnice. Jeho funkce spočívá ve vazbě Gtβγ dimeru G-proteinu transducinu, čímž dochází k poklesu množství dostupného transducinu a modulaci signálu. Funkce fosducinu je negativně regulována prostřednictvím fosforylace a následné interakce s proteinem 14-3-3. Přestože je mechanismus této regulace již do jisté míry znám, narůstá zájem o poznání jeho dalších interakčních partnerů, jmenovitě SUG1 a CRX. SUG1 je podjednotka 26S proteasomu, která zajišťuje mnoho biologických funkcí, zejména pak degradaci mnoha transkripčních faktorů. Jeho úloha v regulační dráze fosducinu není stále dostatečně prozkoumána, ale pravděpodobně se podílí na transportu fosducinu do proteasomu k jeho degradaci. Pro bližší studium tohoto proteinu byly připraveny a testovány jeho čtyři různé expresní konstrukty pro nalezení optimálních podmínek pro jeho expresi a purifikaci. Výsledky těchto purifikací naznačily, že SUG1 vytváří stabilní a velmi dobře rozpustné vysokomolekulární oligomery. Tyto domněnky byly následně potvrzeny měřením dynamického rozptylu světla a analytickou ultracentrifugací. Jeho chování je však plně v souladu s jeho dobře prozkoumaným archeálním homologem,...cs_CZ
uk.abstract.enAABBSSTTRRAACCTT Phosducin (Pdc) is a highly conserved acidic phosphoprotein, which plays an important role in the regulation of G-protein signalization in intact retina. It binds to Gβγ dimer of heterotrimeric G-protein transducin thereby decreases the pool of available transducin resulting in modulation of signal. Function of phosducin is negatively regulated by its phosphorylation followed by interaction with the 14-3-3 protein. Besides this established way of regulation, we were interested in other putative interaction partners of phosducin, like SUG1 and CRX. SUG1 is a subunit of 26S proteasome with a large scale of biological functions, especially a degradation of many transription factors. Its role in regulation of phosducin is still unclear, but is probably involved in targeting of phosducin to 26S proteasome for its degradation. Subsequently, we prepared four different expression constructs of full-length protein in order to find the best expression and purification strategy. These results suggest that all purified fusion proteins of SUG1 form stable and soluble high molecular weight oligomers. This behaviour was confirmed by dynamic light scattering and analytical ultracentrifugation measurements. In addition, this observation is consistent with previous studies of its bacterial counterpart, PAN...en_US
uk.file-availabilityV
uk.publication-placePrahacs_CZ
uk.grantorUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra fyzikální a makromol. chemiecs_CZ


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 3-5, 116 36 Praha; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV