Různé metody přípravy kapilárních kolon plněných Sephadexem pro gelovou chromatografii

Abstract

V této diplomové práci byly připraveny kapilární kolony s vnitřním průměrem 530 µm plněné částicemi gelu. Tyto kolony jsou určeny pro gelovou chromatografii. K jejich přípravě byly použity tři různé metody plnění. Plnění mokrých částic v suspenzi s organickým rozpouštědlem, následným vysušením a nabotnání částic vodou do formy gelu. Plnění mokrých částic přímo v suspenzi s vodnou fází. A nasátí suchých částic gelu vzduchem a následným botnáním vodou do formy gelu. Připravené kolony byly porovnávány pomocí analýz kyseliny hyaluronové a thiomočoviny. Pomocí fenylalaninu byly stanoveny základní parametry kolony určené pro gelovou chromatografii. Tlakové charakteristiky v závislosti na průtokové rychlosti mobilní fáze byly využity pro srovnání kvality náplně kolon připravených různými metodami.

In this diploma thesis, capillary columns with an inner diameter of 530 microns filled with gel particles were prepared. These columns are intended for gel chromatography. Three various methods of filling were used for their preparation. The first method was based on filling of wet particles in suspension with the organic solvent, followed by drying and swelling of particles with water into the form of gel. The second method used filling of wet particles in the suspension form with the aqueous phase. The last method started with suction of dry gel particles by air and continued with their subsequent swelling with water into the form of the gel. The prepared columns have been compared analysing hyaluronic acid and thiourea. The basic parameters specified for the gel column chromatography were determined by using phenylalanine. The pressure characteristics depending on the flow rate of mobile phase were used to compare the quality of packing of the columns prepared by various methods.