Funkce proteinu Pmp3p

Abstract

Kvasinková kolónia počas svojho rastu na pevnom médiu prechádza metabolickými prestavbami, ktoré sa prejavujú jednak zmenou pH v jej okolí a taktiež zmenou membránového potenciálu buniek. Pri skúmaní oscilácií membránového potenciálu bolo zistené, že pri tomto procese hrá dôležitú úlohu malý membránový proteolipid, Pmp3p (Plasma Membrane Proteolipid 3). Táto práca sa zameriava na bližšie pochopenie funkcie Pmp3p najmä cez priame pozorovanie jeho lokalizácie v bunkách rastcich za rôznych podmienok. Boli pripravené kvasinkové kmene, ktoré produkovali rôznym spôsobom značený Pmp3p proteín, čo umožnilo určiť jeho bunkovú lokalizáciu a množstvo v bunkách. Bolo zistené, že Pmp3p je lokalizovaný na plazmatickej membráne a v lipidických partikuliach. Počas vývoja kolónie na respiratívnom i fermentovateľnom médiu bola pozorovaná jeho stabilná koncentrácia. Pri raste v médiu obsahujúcom zvýšenú koncentráciu chloridu sodného nenastalo zvýšenie hladiny Pmp3p-GFP proteínu v bunke. Kľučové slová: Pmp3p, proteolipidy, UPF0057 (PMP3) rodina, Saccharomyces cerevisiae, dlhodobé prežívanie, lipidické partikuly

During development of Saccharomyces cerevisiae colonies on solid substrate, metabolic transitions occur, which are reflected by pH changes around the colony and also by changes in cell membrane potential. Analyses of transmemebrane potential oscillations revealed a function for Plasma Membrane Proteolipid 3 (Pmp3p) in this process. The thesis discusses possible function of Pmp3p protein mainly on the basis of direct observation of Pmp3p localization in vivo under variety of cultivation conditions. Yeast strains with different variants of Pmp3p protein fused with different protein tags that allow monitoring of Pmp3p localization and concentration in cells were prepared by homologous recombination. Localization of Pmp3p in the plasma membrane and in lipid particles was found. The Pmp3p level in cells was stable during development of colonies growing on either respirative or fermentative carbon source medium. High concentration of extracellular sodium chloride did not evoke increase in Pmp3p-GFP concentration. Key words: Pmp3p, proteolipids, UPF0057 (PMP3) family, Saccharomyces cerevisiae, long term survival, lipid particles