Analýza fenobarbitalu v krvi metodou SPME ve spojení off-line s HPLC

Abstract

Univerzita Karlova v Praze, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmaceutické chemie a kontroly léčiv Kandidát: Mgr. Petra Blažková Konzultant: Doc. RNDr. Jaroslav Sochor, Csc. ANALÝZA FENOBARBITALU V KRVI METODOU SPME VE SPOJENÍ OFF-LINE S HPLC Rigorózní práce Tématem práce bylo analytické hodnocení účinných látek kapalinovou chromatografií. Vlastní problematika se týkala hodnocení fenobarbitalu v biologickém materiálu za užití metody mikroextrakce tuhou fází (SPME) ve spojení off-line s vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC). Vlnová délka pro detekci byla 218 nm. Analýza probíhala na analytické koloně C18. Mobilní fáze představovala směs 50 dílů methanolu a 50 dílů vody. Rychlost průtoku kolonou byla 0,6 ml/min. Na kolonu bylo dávkováno 20 µl vzorku. Rozpouštědlo fenobarbitalu bylo směsí 80 dílů methanolu a 20 dílů pufru. Pro izolaci léčiva ze vzorku krve metodou SPME bylo zvoleno vlákno PDMS/DVB, doba sorpce i desorpce byla 20 minut, desorpce probíhala do methanolu. Pro kvantitativní hodnocení fenobarbitalu v králičí krvi byla vypracována kalibrační křivka. Podmínky byly podrobeny validaci.

Charles University in Prague, Pharmaceutical Faculty in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Drug Control Candidate: Mgr. Petra Blažková Consultant: Doc. RNDr. Jaroslav Sochor, Csc. ANALYSIS OF PHENOBARBITAL IN BLOOD OF SPME METHOD COUPLED OFF-LINE WITH HPLC The purpose of the work presented in this thesis was an analytical evaluation of active ingredients using High Performance Liquid Chromatography. The core of the work was an evaluation of phenobarbital level in biological material using Solid Phase Microextraction method in off-line conjunction with HPLC. The wavelength used for detection was 218 nm. C18 HPLC column was used to perform the analysis. Mobile phase was a mixture of 50 parts of methanol and 50 parts of water. The flow rate was set to 0,6 ml/min. Sample amount was 20 µl. A mixture of 80 parts of methanol and 20 parts of a buffer was used as a solvent to dissolve phenobarbital. PDMS/DVB fibre was used to extract the drug from a blood sample by SPME. Sorption and desorption time was 20 minutes. The drug was desorbed into methanol. A calibration curve was created for the quantitative analysis of phenobarbital in rabbit blood. The conditions under which the experiment was undertaken were validated.