Show simple item record

Recombinant cysteine peptidases of ticks
dc.creatorSrba, Jindřich
dc.date.accessioned2021-05-19T14:02:32Z
dc.date.available2021-05-19T14:02:32Z
dc.date.issued2011
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/47356
dc.description.abstractRecombinant cysteine peptidases of Ixodes ricinus Jindřich Srba Abstract Intracellular proteolysis of ingested blood proteins is a crucial physiological process in ticks. In a tick, Ixodes ricinus, cysteine proteases, cathepsins B and L, are part of a gut-associated multi-peptidase complex. This thesis deals with preparation of recombinant procathepsins B and L and characterization of functional and biochemical properties of cathepsins B and L. After expression procathepsins B and L in E. coli and their purification from inclusion bodies by affinity chromatography, the basic strategy was searched that would enable to achieve successful refolding. A suitable type in both cases showed to be "basic" refolding. Both refolded procathepsins were auto-activated in the acidic environment of pH 4,0; cathepsin B (but not cathepsin L) also at pH 5,5. Activity was determined at pH dependence substrate specificity and inhibition. The pH optimums for hydrolytic activity of cathepsins B and L were in the range of 4,5 - 5,5 and 3,0 - 3,5, respectively. Both enzymes were blocked by an inhibitor of cysteine peptidase group and each of them by specific inhibitors designed for mammalian cathepsins B and L. The results of this thesis show that cathepsins B and L produced in the gut I. ricinus exhibit exo- and endo-peptidase...en_US
dc.description.abstractRekombinantní cysteinové peptidasy klíšťat Jindřich Srba Abstrakt Intracelulární proteolýza krevních proteinů je zásadním fyziologickým procesem u klíšťat. U klíštěte Ixodes ricinus jsou cysteinové peptidasy, katepsiny B a L, součástí multi-peptidasového komplexu střev. Tato diplomová práce se zabývá přípravou rekombinatních prokatepsinů B a L a charakteristikou funkčních a biochemických vlastností katepsinů B a L. Po expresi prokatepsinů B a L v E. coli a jejich purifikaci z inkluzních tělísek afinitní chromatografií se hledala základní strategie, která by umožnila dosáhnout úspěšného refoldingu. Vhodným typem refoldingu se ukázal pro oba studované prokatepsiny "bazický" refolding. Oba prokatepsiny byly auto-aktivovány v kyselém prostředí pH 4,0; katepsin B (nikoli katepsin L) také při pH 5,5. Byla určena závislost aktivity na pH, substrátová a inhibiční specificita. Optimální pH pro hydrolytickou aktivitu katepsinů B a L byla v rozmezí 4,5 - 5,5 a 3,0 - 3,5. Oba enzymy byly blokovány skupinovým inhibitorem cysteinových peptidas a každý z nich specifickým inhibitorem navrženým pro savčí katepsiny B a L. Výsledky této diplomové práce ukazují, že katepsiny B a L produkované ve střevě klíštěte I. Ricinus vykazují výraznou exo- resp. endo-petidasovou aktivitu, což potvrzuje jejich předpokládanou úlohu v...cs_CZ
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakultacs_CZ
dc.titleRekombinantní cysteinové peptidasy klíšťatcs_CZ
dc.typerigorózní prácecs_CZ
dcterms.created2011
dcterms.dateAccepted2011-12-06
dc.description.departmentDepartment of Biochemistryen_US
dc.description.departmentKatedra biochemiecs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Scienceen_US
dc.description.facultyPřírodovědecká fakultacs_CZ
dc.identifier.repId115759
dc.title.translatedRecombinant cysteine peptidases of ticksen_US
dc.identifier.aleph001404012
thesis.degree.nameRNDr.
thesis.degree.levelrigorózní řízenícs_CZ
thesis.degree.disciplineBiochemistryen_US
thesis.degree.disciplineBiochemiecs_CZ
thesis.degree.programBiochemistryen_US
thesis.degree.programBiochemiecs_CZ
uk.thesis.typerigorózní prácecs_CZ
uk.taxonomy.organization-csPřírodovědecká fakulta::Katedra biochemiecs_CZ
uk.taxonomy.organization-enFaculty of Science::Department of Biochemistryen_US
uk.faculty-name.csPřírodovědecká fakultacs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Scienceen_US
uk.faculty-abbr.csPřFcs_CZ
uk.degree-discipline.csBiochemiecs_CZ
uk.degree-discipline.enBiochemistryen_US
uk.degree-program.csBiochemiecs_CZ
uk.degree-program.enBiochemistryen_US
thesis.grade.csUznánocs_CZ
thesis.grade.enRecognizeden_US
uk.abstract.csRekombinantní cysteinové peptidasy klíšťat Jindřich Srba Abstrakt Intracelulární proteolýza krevních proteinů je zásadním fyziologickým procesem u klíšťat. U klíštěte Ixodes ricinus jsou cysteinové peptidasy, katepsiny B a L, součástí multi-peptidasového komplexu střev. Tato diplomová práce se zabývá přípravou rekombinatních prokatepsinů B a L a charakteristikou funkčních a biochemických vlastností katepsinů B a L. Po expresi prokatepsinů B a L v E. coli a jejich purifikaci z inkluzních tělísek afinitní chromatografií se hledala základní strategie, která by umožnila dosáhnout úspěšného refoldingu. Vhodným typem refoldingu se ukázal pro oba studované prokatepsiny "bazický" refolding. Oba prokatepsiny byly auto-aktivovány v kyselém prostředí pH 4,0; katepsin B (nikoli katepsin L) také při pH 5,5. Byla určena závislost aktivity na pH, substrátová a inhibiční specificita. Optimální pH pro hydrolytickou aktivitu katepsinů B a L byla v rozmezí 4,5 - 5,5 a 3,0 - 3,5. Oba enzymy byly blokovány skupinovým inhibitorem cysteinových peptidas a každý z nich specifickým inhibitorem navrženým pro savčí katepsiny B a L. Výsledky této diplomové práce ukazují, že katepsiny B a L produkované ve střevě klíštěte I. Ricinus vykazují výraznou exo- resp. endo-petidasovou aktivitu, což potvrzuje jejich předpokládanou úlohu v...cs_CZ
uk.abstract.enRecombinant cysteine peptidases of Ixodes ricinus Jindřich Srba Abstract Intracellular proteolysis of ingested blood proteins is a crucial physiological process in ticks. In a tick, Ixodes ricinus, cysteine proteases, cathepsins B and L, are part of a gut-associated multi-peptidase complex. This thesis deals with preparation of recombinant procathepsins B and L and characterization of functional and biochemical properties of cathepsins B and L. After expression procathepsins B and L in E. coli and their purification from inclusion bodies by affinity chromatography, the basic strategy was searched that would enable to achieve successful refolding. A suitable type in both cases showed to be "basic" refolding. Both refolded procathepsins were auto-activated in the acidic environment of pH 4,0; cathepsin B (but not cathepsin L) also at pH 5,5. Activity was determined at pH dependence substrate specificity and inhibition. The pH optimums for hydrolytic activity of cathepsins B and L were in the range of 4,5 - 5,5 and 3,0 - 3,5, respectively. Both enzymes were blocked by an inhibitor of cysteine peptidase group and each of them by specific inhibitors designed for mammalian cathepsins B and L. The results of this thesis show that cathepsins B and L produced in the gut I. ricinus exhibit exo- and endo-peptidase...en_US
uk.file-availabilityV
uk.grantorUniverzita Karlova, Přírodovědecká fakulta, Katedra biochemiecs_CZ
thesis.grade.codeU
uk.publication-placePrahacs_CZ
uk.thesis.defenceStatusU


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV