Characterization of modern HPLC columns and their application potential

Abstract

(CZ) Cílem předkládané disertační práce byla charakterizace moderních HPLC kolon z hlediska jejich interakčních možností a ukázka jejich aplikačního potenciálu. První část disertační práce je zaměřena na alternativní reverzní HPLC kolony na bázi oxidu zirkoničitého. Tyto kolony vykazují vysokou chemickou stabilitu a rozšířený interakční mechanismus, který přináší řadu výhod při vývoji analytických metod. Detailní studie chromatografického chování biologicky aktivních nonapeptidů potvrdila značný vliv složení mobilní fáze na retenční mechanismus. Pro rozpoznání interakcí podílejících se na separačním procesu byly následně využity různé přístupy. Základní vlastnosti (hydrofobicita a polarita) kolony na bázi oxidu zirkoničitého s polystyrenovou stacionární fází byly zjištěny pomocí jednoduchých chromatografických testů. Model lineárních vztahů volných energií popsal interakce převládající v různých separačních systémech se zirkoniovou kolonou. Aplikace sady bazických látek vedla k odhalení iontově- výměnných interakcí, které se mohou významně podílet na separačním procesu v systémech se zirkoniovými kolonami. Druhá část práce se věnuje novým chirálním stacionárním fázím na bázi derivatizovaných cyklofruktanů. Strukturně odlišné chirální látky (binaftylové deriváty a některá chiralní léčiva) byly...

(EN) The aim of the dissertation thesis is characterization of modern HPLC columns from the point of their interaction possibilities and demonstration of their application potential. The first part of the thesis is focused on alternative reversed-phase HPLC columns based on zirconium dioxide. These packings offer excellent chemical stability and additional interactions that can be helpful in the development of analytical methods. A detailed study of the chromatographic behaviour of biologically active nonapeptides as model analytes confirmed the substantial effect of mobile phase composition on retention mechanism. Consequently, HPLC separation systems with zirconia-based polystyrene column were characterized by distinct approaches that allowed recognition of the interactions participating in the separation process. Empirically based chromatographic tests evaluated the fundamental properties of the system - hydrophobicity and polarity. The complex model of linear free energy relationship described the prevailing interactions in different separation systems. Application of a set of basic compounds revealed the contribution of ion-exchange interactions participating in the separation systems with zirconia-based column. The second part of the thesis is devoted to new cyclofructan-based chiral...