Show simple item record

Cloning, expression and purification of human AKR1C1
dc.contributor.advisorWsól, Vladimír
dc.creatorVomočilová, Iva
dc.date.accessioned2017-05-07T15:39:04Z
dc.date.available2017-05-07T15:39:04Z
dc.date.issued2012
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/20.500.11956/44994
dc.description.abstractUniverzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Iva Vomočilová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování, exprese a purifikace lidské AKR1C1 Práce je zaměřena na syntézu lidského proteinu AKR1C1. Kódová sekvence pro tento protein byla objednána v podobě cDNA, která byla vložena do plazmidu pOTB7. Dodané buňky Escherichia coli, nesoucí takto upravený plazmid, byly namnoženy a plazmid byl purifikován pomocí alkalické lýzy. S purifikovaným plazmidem byla provedena polymerasová řetězová reakce s dvojicí navržených primerů, které obsahovaly restrikční místo. S ohledem na potřeby pozdějších reakcí byla zvolena rozpoznávací místa pro restrikční endonukleasy NdeI a XhoI. Pro ověření kvality purifikace plazmidu a úspěšnosti PCR byla použita horizontální elektroforéza. Produkt PCR byl purifikován s využitím elektroforézy na ultra-čisté agaróze. Jako vektor byl zvolen plazmid pET-28b(+). Ten byl namnožen v předem upravených buňkách E. coli HB101 a následně purifikován. Purifikovaný plazmid a purifikovaný produkt PCR byly štěpeny pomocí restrikčních endonukleas XhoI a NdeI. Oba naštěpené úseky byly přečištěny a s využitím T4 DNA ligasy byl fragment PCR vložen do otevřeného vektoru pET-28b(+). Takto upravený plazmid byl...cs_CZ
dc.description.abstractCharles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Iva Vomočilová Supervisor: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Title of diploma thesis: Cloning, expression and purification of human AKR1C1 This work is focused on synthesis of human AKR1C1. AKR1C1 coding sequence (cDNA), incorporated into plasmid pOTB7, was purchased and delivered in Escherichia coli cells. These cells with modified plasmid were multiplied in LB medium. After the multiplication plasmid was isolated and purified by the alkaline lysis process. Coding sequence for AKR1C1 was amplified by PCR method. The primers were designed in advance and contained restriction sites for XhoI and NdeI endonucleases. The results of PCR were validated by gel electrophoresis. Then the PCR product was purified on ultra-pure agarose gel. In the next step plasmid pET-28b(+) was used to insert prepared coding sequence. Plasmid was multiplied in competent cells E. coli HB101 and purified by the alkaline lysis process. Purified PCR fragment and plasmid were double digested by a pair of restriction endonucleases mentioned above. These digested fragments were purified and PCR fragment was put into the open vector pET-28b(+) by T4 DNA ligase enzyme. This modified plasmid was transferred into the...en_US
dc.languageČeštinacs_CZ
dc.language.isocs_CZ
dc.publisherUniverzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Královécs_CZ
dc.titleKlonování, exprese a purifikace lidské AKR1C1cs_CZ
dc.typediplomová prácecs_CZ
dcterms.created2012
dcterms.dateAccepted2012-06-04
dc.description.departmentDepartment of Biochemical Sciencesen_US
dc.description.departmentKatedra biochemických vědcs_CZ
dc.description.facultyFaculty of Pharmacy in Hradec Královéen_US
dc.description.facultyFarmaceutická fakulta v Hradci Královécs_CZ
dc.identifier.repId101593
dc.title.translatedCloning, expression and purification of human AKR1C1en_US
dc.contributor.refereeNovotná, Eva
dc.identifier.aleph001470975
thesis.degree.nameMgr.
thesis.degree.levelmagisterskécs_CZ
thesis.degree.disciplinePharmacyen_US
thesis.degree.disciplineFarmaciecs_CZ
thesis.degree.programPharmacyen_US
thesis.degree.programFarmaciecs_CZ
uk.thesis.typediplomová prácecs_CZ
uk.taxonomy.organization-csFarmaceutická fakulta v Hradci Králové::Katedra biochemických vědcs_CZ
uk.taxonomy.organization-enFaculty of Pharmacy in Hradec Králové::Department of Biochemical Sciencesen_US
uk.faculty-name.csFarmaceutická fakulta v Hradci Královécs_CZ
uk.faculty-name.enFaculty of Pharmacy in Hradec Královéen_US
uk.faculty-abbr.csFaFcs_CZ
uk.degree-discipline.csFarmaciecs_CZ
uk.degree-discipline.enPharmacyen_US
uk.degree-program.csFarmaciecs_CZ
uk.degree-program.enPharmacyen_US
thesis.grade.csVýborněcs_CZ
thesis.grade.enExcellenten_US
uk.abstract.csUniverzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Iva Vomočilová Školitel: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování, exprese a purifikace lidské AKR1C1 Práce je zaměřena na syntézu lidského proteinu AKR1C1. Kódová sekvence pro tento protein byla objednána v podobě cDNA, která byla vložena do plazmidu pOTB7. Dodané buňky Escherichia coli, nesoucí takto upravený plazmid, byly namnoženy a plazmid byl purifikován pomocí alkalické lýzy. S purifikovaným plazmidem byla provedena polymerasová řetězová reakce s dvojicí navržených primerů, které obsahovaly restrikční místo. S ohledem na potřeby pozdějších reakcí byla zvolena rozpoznávací místa pro restrikční endonukleasy NdeI a XhoI. Pro ověření kvality purifikace plazmidu a úspěšnosti PCR byla použita horizontální elektroforéza. Produkt PCR byl purifikován s využitím elektroforézy na ultra-čisté agaróze. Jako vektor byl zvolen plazmid pET-28b(+). Ten byl namnožen v předem upravených buňkách E. coli HB101 a následně purifikován. Purifikovaný plazmid a purifikovaný produkt PCR byly štěpeny pomocí restrikčních endonukleas XhoI a NdeI. Oba naštěpené úseky byly přečištěny a s využitím T4 DNA ligasy byl fragment PCR vložen do otevřeného vektoru pET-28b(+). Takto upravený plazmid byl...cs_CZ
uk.abstract.enCharles University in Prague Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Iva Vomočilová Supervisor: Prof. Ing. Vladimír Wsól, Ph.D. Title of diploma thesis: Cloning, expression and purification of human AKR1C1 This work is focused on synthesis of human AKR1C1. AKR1C1 coding sequence (cDNA), incorporated into plasmid pOTB7, was purchased and delivered in Escherichia coli cells. These cells with modified plasmid were multiplied in LB medium. After the multiplication plasmid was isolated and purified by the alkaline lysis process. Coding sequence for AKR1C1 was amplified by PCR method. The primers were designed in advance and contained restriction sites for XhoI and NdeI endonucleases. The results of PCR were validated by gel electrophoresis. Then the PCR product was purified on ultra-pure agarose gel. In the next step plasmid pET-28b(+) was used to insert prepared coding sequence. Plasmid was multiplied in competent cells E. coli HB101 and purified by the alkaline lysis process. Purified PCR fragment and plasmid were double digested by a pair of restriction endonucleases mentioned above. These digested fragments were purified and PCR fragment was put into the open vector pET-28b(+) by T4 DNA ligase enzyme. This modified plasmid was transferred into the...en_US
uk.file-availabilityV
uk.publication.placeHradec Královécs_CZ
uk.grantorUniverzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biochemických vědcs_CZ
dc.identifier.lisID990014709750106986


Files in this item

Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail
Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record


© 2017 Univerzita Karlova, Ústřední knihovna, Ovocný trh 560/5, 116 36 Praha 1; email: admin-repozitar [at] cuni.cz

Za dodržení všech ustanovení autorského zákona jsou zodpovědné jednotlivé složky Univerzity Karlovy. / Each constituent part of Charles University is responsible for adherence to all provisions of the copyright law.

Upozornění / Notice: Získané informace nemohou být použity k výdělečným účelům nebo vydávány za studijní, vědeckou nebo jinou tvůrčí činnost jiné osoby než autora. / Any retrieved information shall not be used for any commercial purposes or claimed as results of studying, scientific or any other creative activities of any person other than the author.

DSpace software copyright © 2002-2015  DuraSpace
Theme by 
@mire NV