Příprava rekombinantních extracelulárních domén lidských leukocytárních receptorů LLT1 a NKR-P1A

Abstract

NK buňky jsou charakterizovány jako velké granulární lymfocyty, které patří mezi významné buněčné složky přirozené imunity. Dokáží zabíjet cílové buňky velmi rychle, v řádech minut, což je řadí do role obránců první linie. Své cíle rozpoznávají pomocí svých povrchových receptorů. Tato práce se zabývá přípravou extracelulárních domén lidských leukocytárních receptorů hNKR-P1A a jeho fyziologického ligandu LLT1. Proteiny byly produkovány v E. coli ve formě inkluzních tělísek a renaturovány in vitro metodou rychlého naředění (hNKR-P1A) a metodou pomalého naředění (LLT1). Purifikace probíhala pomocí chromatografických metod a získané proteiny byly charakterizovány technikami hmotnostní spektrometrie.

NK cells are characterized as large granular lymphocytes that play important role in innate immunity. They are called as "first line defense", because of their capability to kill the target cells very fast, in a few minutes. They recognize the target cells using their surface receptors. This diploma thesis describes the preparation of extracellular domains of the human leukocyte receptor hNKR-P1A and its physiological ligand LLT1. The proteins were produced in E. coli as inclusion bodies, refolded in vitro by rapid dilution method (hNKR-P1A) and slow dilution method (LLT1). The proteins were purificated by chromatography and characterized by mass spectrometry techniques.