Příprava konstruktů pro transgenní expresi DPP-IV a FAP

Abstract

Příprava konstruktů pro transgenní expresi DPP-IV a FAP Bc. Dalibor Košek Abstrakt: Skupina proteinů DASH (Dipeptidylpeptidase IV aktivitou a/nebo strukturou homologní) představuje soubor multifunkčních molekul, z nichž většina vykazuje peptidasovou aktivitu podobnou dipeptidylpeptidase IV (DPP-IV, EC 3.4.14.5, identická s diferenciačním antigenem lymfocytů CD26). Z proteinů i peptidů obecně odštěpují N-terminální X-Pro dipeptid. Tato práce byla zaměřena na dva proteiny, DPP-IV/CD26, kanonického představitele DASH, a fibroblastový aktivační protein alfa (FAP-α). Jedná se o transmembránové proteiny II. typu s rozdílnou tkáňovou distribucí, u nichž jsou však známé i extracelulární rozpustné varianty. Z dosavadních poznatků vyplývá, že oba mají význam v procesech vzniku a rozvoje mnoha nádorových onemocnění a to mechanismy závislými i nezávislými na enzymatické aktivitě. Pro objasnění jejich úlohy v gliomagenesi bylo navrhnuto připravit experimentální model v podobě glioblastomových buněčných linií s definovatelným fenotypem DPP-IV/CD26 a FAP-α. Bude zahrnovat enzymaticky neaktivní formy proteinů i analogy s různým subcelulárním směřováním. Takovýto model dovolí posoudit vliv DPP-IV/CD26 a FAP-α na rozvoj gliálního nádoru, význam jejich enzymové aktivity a subcelulární distribuce v tomto procesu. Experimenty...

Preparation of contructs for transgenic expression of DPP-IV and FAP Bc. Dalibor Košek Abstract: DASH (Dipeptidyl peptidase-IV Activity and/or Structure Homologues) protein group involves multi-funcional molecules typically bearing enzymatic activity similar to the Dipeptidyl peptidase-IV (DPP-IV, EC 3.4.14.5, identical with lymphocyte differentiation antigen CD26). In general, they cleave multiple regulatory as well as structural peptides and proteins, possessing proline residue on the penultimate position from the N-terminus. We focused on two members of this group: canonical DPP-IV and Fibroblast activation protein alpha (FAP-α). Both are typically type II plasma membrane proteins with specific tissue distribution. Soluble extrecellular forms have also been identified. Available knowledge suggest important roles of these proteins in oncogenesis, executed by their enzymatic activity but also by non-proteolytic interactions. To study their role in gliomagenesis we designed several experimental models exploiting astrocytoma cell lines with defined DPP-IV or FAP-α phenotype. Enzymatically inactive forms and analogues with different subcellular distribution will also be included. These models will allow to assess the impact of DPP-IV and FAP-α on the glial tumor development and the importance of their...