Interakce Borrelia sp. s buňkami HL-60 a monocyty a kultivace Anaplasma phagocytophilum na buňkách HL-60

Abstract

Borrelia burgdorferi sensu lato a Anaplasma phagocytophilum jsou mikroorganismy způsobující onemocnění lymeskou borreliózu a lidskou granulomatózní anaplasmózu. Jejich společným vektorem v Evropě jsou klíšťata rodu Ixodes. V naší práci jsme se zaměřili na interakce buněk nespecifické imunitní odpovědi s původci lymeské borreliózy, které jsou svou funkcí v časné fázi onemocnění nezastupitelné. Anaplasma phagocytophilum je obtížně kultivovatelný mikroorganizmus, který je možno kultivovat pouze na buněčných kulturách. Úspěšná kultivace Anaplasma phagocytophilum z pacientů z naší geografické oblasti je klíčová pro další experimenty a také důležitá z diagnostického hlediska. V našich experimentech jsme používali ověřené tkáňové kultury buněk HL-60, psích monocytů DH82 a myších monocytů P388D1. Při studiu interakcí původců lymeské borreliózy s buňkami jsme používali dva kmeny odlišných druhů Borrelia. Borrelia garinii M192 a Borrelia burgdorferi sensu stricto B31. Tyto dva kmeny se liší virulencí. Kmen M192 je virulentní, kdežto kmen B31 již pasážováním svou virulenci ztratil. Zaměřili jsme se na studium morfologických změn pomocí světelné mikroskopie (pozorování barevných fixovaných preparátů a pozorování v temném poli), případně transmisní elektronové mikroskopie. Během našich experimentů jsme došli k závěru,...

Borrelia burgdorferi sensu lato and Anaplasma phagocytophilum are causative agents of Lyme disease and human granulocytic anaplasmosis. Their common vector in Europe are the ticks from the genus Ixodes. In our work, we focused on interaction of innate immune cells with the causative agent of Lyme diseases, that are insubstitutable in their function in the early phase of the disease. Anaplasma phagocytophilum is hard to cultivate, the only possibility is to cultivate it in cell cultures. Successful cultivation of Anaplasma phagocytophilum acquired from patients in our geographic area is crucial for following experiments and for diagnostics too. In our experiments, we used validated cell cultures of HL-60 cells, canine monocytes DH82 and murine monocytes P388D1. During our studies of interaction of the causative agent of Lyme diseases with cells, we used two strains of different species Borrelia. Borrelia garinii M192 and Borrelia burgdorferi sensu stricto B31. These strains vary in virulence. The strain M192 is virulent, but the strain B31 lost its virulence by passages. We specialised in study of morphological changes using light microscopy (observation of dyed and fixed preparates and observation in dark field), eventually by transmision electron microscopy. During our experiments, we concluded that HL-60...