Stanovení sibiromycinu metodou UPLC.

Abstract

Sibiromycin, antibiotikum strukturně patřící do skupiny pyrrolo-1,4-benzo- diazepinů, je produkován aktinomycetou Streptosporangium sibiricum. Sibiromycin vykazuje antibakteriální a především protinádorové účinky, které však díky jeho prokázané kardiotoxicitě zatím nelze využít. Další výzkum možného terapeutického využití sibiromycinu se zabývá přípravou nových netoxických derivátů produkovaných geneticky manipulovanými kmeny S. sibiricum. Pro tyto účely byla vyvinuta a částečně validována nová rutinní chromatografická UPLC/UV a prekoncentrační metoda. Fermentační médium bylo extrahováno metodou extrakce na tuhé fázi (solid phase extraction, SPE) na kolonkách OASIS MCX, založených na kationtové výměně. Získaný extrakt byl po odpaření a rozpuštění v methanolu dávkován na UPLC BEH C18 kolonu a chromatografován v gradientovém módu s mobilními fázemi methanol (A) a 0,1% kyselina trifluoroctová (B). Detekční limit metody byl 40 ng/ml fermentačního média, výtěžnost SPE metody byla 74,75 % a její reprodukovatelnost vyjádřená jako RSD byla 5,18 %. Metoda byla aplikována na sledování rozdílné produkce sibiromycinu kmenem S. sibiricum na 13 typech médií. Bylo zjištěno, že složení fermentačního média ovlivňuje nejen celkovou produkci sibiromycinu, ale také syntézu jeho přírodních derivátů, které byly na závěr...

Sibiromycin is produced by actinomycetes of Streptosporangium sibiricum and structurally belongs to family of pyrrolo-1,4-benzodiazepines. Sibiromycin is characterized by antibacterial and especially antitumor activity but due to its proved cardiotoxicity it cannot be used. The following research of possible therapeutic sibiromycin utilization is concerned on new nontoxic derivatives produced by genetic manipulated strains of S. sibiricum. For this purpose a new routine chromatographic UPLC-UV method with analyte preconcentration was developed and partially validated. A fermentation broth was extracted by solid phase extraction (SPE) on OASIS MCX columns with the sorbent based on a cation-exchange. Eluted extract was evaporated, reconstituted in methanol and loaded onto UPLC BEH C18 column and analyzed under gradient mode with mobile phases of methanol (A) and trifluoroacetic acid (B). Detection limit of the method was determined as 40 ng/ml, the recovery was 74.75 % and its reproducibility expressed as RSD was 5.18 %. The method was applied to comparison of sibiromycin production by S. sibiricum on 13 different fermentation media. It was found, that a composition of fermentation media influences not only the sibiromycin production but also a synthesis of sibiromycin nature derivatives, which were...