Oprava oxidativního poškození DNA u buněk čínského křečíka deficientních v nukleotidové excizní reparaci DNA

Abstract

Oprava oxidativního poškození DNA u buněk čínského křečíka deficientních v nukleotidové excizní reparaci DNA Abstrakt V této rigorózní práci jsme se pokusili charakterizovat opravu oxidativního poškození u ovariálních buněk křečíka čínského. K experimentům jsme využili metodu kometového testu, ke zvýšení citlivosti měření jsme použili specifické endonukleázy a specifické inhibitory excizní reparace - inhibitor poly(ADP-ribóza)polymerázy (PARP) 3- aminobenzamid (3-AB) a cytosinarabinosid s hydroxymočovinou (AraC /HU). PARP-1 je faktorem důležitým pro opravu poškození pomocí bázové excizní reparace (BER). Buňky deficientní v PARP-1 vykazují zhoršení pravděpodobně jak long- patch LP-BER, tak short-patch SP-BER. O AraC/HU je známo, že inhibuje long-patch excizní reparaci. V našich pokusech jsme při opravě poškození způsobeného peroxidem vodíku (H2O2) pozorovali vliv 3-AB, účinek AraC/HU se neprojevil. Pro srovnání jsme provedli též pokusy s metylmetansulfonátem (MMS). U buněk ovlivněných tímto monofunkčním alkylačním činitelem jsme zaznamenali zpomalení reparace v přítomnosti jak 3-AB, tak i AraC/HU. Na základě těchto zjištění se domníváme, že oprava poškození způsobeného vlivem MMS i vlivem H2O2 probíhá u buněk křečíka čínského formou BER, ovšem odlišným mechanismem - u poškození zůsobeného MMS pravděpodobně...

The repair of oxidative DNA damage in the Chinese hamster cell line deficient in nucleotide excision repair Abstract The aim of our work was to specify DNA oxidative damage repair in the Chinese hamster ovary cell line. Comet assay was used to detect the damage consequences - DNA breaks. We were capable of achieving high method sensitivity due to application of specific endonucleases and specific inhibitors of excision repair - inhibitor of poly(ADP- ribose)polymerase PARP 3-aminobenzamide (3-AB) and cytosine arabinoside with hydroxyurea (AraC/HU). PARP-1 is an important factor in the base excision repair (BER) process. PARP-1 deficient cells show recovery impairment both in LP-BER and SP-BER way. AraC/HU is known as the long-patch excision repair inhibitor. The results of our experiments showed the inhibiting effect of 3-AB on the repair of hydrogen peroxide-induced DNA damage. But in the same setting the AraC/HU effect on repair was not observed. To make the value of experimental results more significant and clear, we decided for additional experiments with monofunctional alkylating agent methyl methanesulfonate (MMS). Damage caused by MMS showed slower repair both when 3-AB or AraC/HU were present during the repair period. Based on all available results we suppose that the MMS and also hydrogen peroxide...