Thiopurinmethyltransferéza - klinický význam genotypizace a fenotypizace

Abstract

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Blanka Černá Školitel: Doc. PharmDr. Martin Beránek, PhD. Název diplomové práce: Thiopurin S-methyltransferasa - klinický význam genotypizace a fenotypizace Thiopurin S-methyltransferasa (TPMT) katalyzuje S-methylaci thiopurinových léčiv jako jsou 6-merkaptopurin a thioguanin. Polymorfismy v genu pro TPMT představují důležitý fakt v oblasti klinické farmakogenetiky. Velké rozdíly ve stupni aktivity TPMT v lidské tkáni jsou důsledkem přítomnosti mutace v genu pro tento enzym. Tyto polymorfismy jsou tak důležitým faktorem v účinnosti léčby thiopuriny. Nízká hodnota aktivity enzymu se objevuje v přítomnosti mutace v genu pro tento enzym, vyšší hodnota aktivity enzymu naopak bez přítomnosti mutace. Genotypizovali jsme TPMT gen pomocí metody real-time PCR u vybrané skupiny pacientů (n=55) s autoimunitními onemocněními. Pacienti byli v průměrném věku 16,7 roku. Z nesrážlivé krve sbírané do EDTA (n=55) byla izolována DNA pomocí QIAmp Mini Kitu (Qiagen, Německo) a použita pro genotypizaci enzymu TPMT. Genotypizace byla provedena metodou real time PCR metody v Light Cycleru (Roche, Německo). TPMT byla fenotypizována na Lékařské fakultě v Hradci Králové na Ústavu farmakologie. Pro fenotypizaci byl použit...

Charles University in Prague Faculty of pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical science Candidate: Blanka Černá Supervisor: Doc. PharmDr. Martin Beránek, PhD. Title of Diploma Thesis: Thiopurine S-methyltransferase - clinical importace of genotyping and phenotyping. Thiopurine S-methyltransferase catalyzes S-methylation thiopurine's drugs such as 6-mercaptopurine and thioguanine. TPMT genetic polymorphisms represent an important role in clinical pharmacogenetics. The differences in TPMT activity result from mutations in gene for TPMT. The polymorphisms are important factor in efficacy of treatment by thiopurine drugs. Patients inheriting low activity of enzyme TPMT have mutated allels, patients inheriting high activity of TPMT are usualy wild types. TPMT gen was genotypized by method real-time PCR in volunteers (n=55) with autoimmune diseases. The average of patient's age was 16,7 years. From blood collected into EDTA DNA was isolated by using QIAmp Mini Kit (Quiagen, Germany) and it was used for genotyping of TPMT. Genotyping was carried out by real-time PCR in LightCycler (Roche, Germany). TPMT was phenotypized in Hradec Králové in Medical Faculty of Charles University in Department of Pharmacology. The lysate of suspension of erythrocyte was used for phenotyping (The blood was...