Příprava radioaktivně značeného albuminu

Abstract

Cíl: Tato diplomová práce byla zaměřena na vypracování pro naše podmínky optimální metody značení albuminu vybraným radionuklidem - techneciem 99m Tc. Naším úkolem bylo zvládnout příslušné metodiky potřebné k vypracování vhodného postupu značení albuminu uvedeným radioizotopem a rovněž otestovat i biologické chování značeného albuminu in vitro v buněčném experimentu s čerstvě izolovanými potkaními ledvinnými buňkami. Cílem diplomové práce bylo následně vyhodnotit provedené experimenty, porovnat získané výsledky s dalšími známými metodami značení albuminu techneciem 99m Tc a zpracovat získané výsledky do formy odborného vědeckého sdělení. Metody: Ke značení albuminu bylo použito nízkého pH a vysoké koncentrace albuminu. K redukci technecistanu 99m Tc bylo použito roztoku SnCl2.2H2O. Přečištění značeného albuminu proběhlo gelovou permeační chromatografií za použití Sephadexu G-50. Bicinchoninovou metodou byla stanovena poloha peaku albuminu ve frakcích. Stanovením chromatografického spektra samotného technecistanu byla stanovena poloha peaku technecistanu. Kontrola značení proběhla stanovením elučního spektra. Radiochemická čistota značeného albuminu byla ověřena chromatografií na papíře a následnou detekcí. K buněčnému experimentu byl použit čerstvě označený albumin. Byla sledována akumulace...

Objectives: This senior thesis was aimed at determining a method of albumin labelling with a particular radionuclide - technetium 99m Tc. Our task was to review the various possible methods needed for working out a procedure for albumin labelling with the mentioned radioisotope and also to test the behavior of labelled albumin in vitro in experiments with newly-isolated rat kidney cells. The next objectives of this work were to analyze the performed experiments, compare the results with other known procedures of albumin labelling with technetium 99m Tc and cast the results in the form of a scientific statement. Methods: A low pH and high concentration of albumin were useful for the albumin labelling experiments. A solution of SnCl2.2H2O was used for the reduction of pertechnetate. Purification of labelled albumin was performed by gel chromatography with a Sephadex G-50. The locations of albumin peaks in the chromatographic fractions were determined by the bicinchonic method. The location of pertechnetate was found by investigating the chromatographic spectrum of pertechnetate. Investigation of the elution spectrum was used to check for proper labelling. The radiochemical purity of labelled albumin was verified by paper chromatography and subsequent detection. Newly- labelled albumin was used in the...