Použití vícekanálové průtokové cytometrie v biomedicíně a experimentální biologii

Abstract

Průtoková cytometrie je laboratorní metoda umožňující kvantitativně i kvalitativně analyzovat velké množství buněk v suspenzi. Zprostředkovává informaci o jejich velikosti a granularitě, identifikuje buňky pomocí fluorescenčně značených protilátek specifických pro jejich povrchové i vnitrobuněčné receptory. Tento projekt byl zaměřen na buněčné populace, jejichž analýza je komplikována nejasným imunofenotypem či extrémně malým zastoupením ve zkoumaném vzorku. Analýza stromálních fibroblastů zkoumaných tumorů (benigní a maligní histiocytomy, bazaliom, spinaliom) přispěla k pochopení regulace genové exprese způsobené nádorovým prostředím. Stromální fibroblasty zkoumaných nádorů vykazují schopnost vytvářet prostředí vážně modifikující fenotyp normálních epiteliálních keratinocytů, které získávají fenotyp podobný nádorovým buňkám. Byla zavedena reprodukovatelná, rychlá a vysoce senzitivní metoda detekce extrémně vzácných nehematopoetických buněk. Počty CFU-En nekorelují s průtokově-cytometricky stanovenými počty CEC ani EPC. Tyto kolonie jsou utvářeny za součinnosti CD14+ monocytů a CD4+ T lymfocytů. Počty CEC a EPC jsou v úzkém vztahu s poškozením cévního endotelu působeného systémovými onemocněními. Jejich zastoupení se dále mění v reakci na aktuální stav onemocnění. Naše pozorování mohou mít značný vliv v...

Flow-cytometry is a process on which large numbers of single cells are quantitatively and qualitatively analyzed. This method gives information about size, granularity surface or intracellular markers of every single cell in suspension. In modern biology is worthy to perform quick, objective multiparametric analyses of cell phenotype. This project was focused on cells, which analyses are complicated by extreme rareness or lack of clearly identifying specific markers. Analysis of stromal cells of the investigated tumors (histiocytoma and tumor fibroblasts originating in squamous epithelium: basalioma (BCCF) and spinalioma (SCCF) elucidated alteration of gene expression induced by tumor cells. Tumor-derived stromal fibroblasts acquire distinct properties to shape a microenvironment conducive to altering the phenotypic characteristics of normal epithelial cells in vitro. Reproducible, quick and highly sensitive method of detection extremely rare non-haematopoetic cells (EPC, CEC) was established. Numbers of CFU-En correlate neither with circulating endothelial progenitors nor with matured endothelial cells detected by flowcytometry. These colonies are formed in cooperation of CD14 + and CD4+ cells. Numbers of endothelial progenitors and matured endothelial cells are closely related with vessel endothelium...