Studium odpovědi vrozené buněčné imunity na replikaci BK polyomaviru

Abstract

BK polyomavirus (BKPyV) je patogenem způsobujícím závažná onemocnění u lidí s potlačenou imunitou. V dnešní době stále není jasné, jakým způsobem buňky rozeznávají infekci tímto virem. Na základě předchozích studií lze předpokládat, že únik virové a buněčné DNA do cytosolu během virové replikace je tím procesem, který v infikovaných buňkách spouští odpověď vrozené imunity. Kromě toho je známo, že během virové infekce dochází k asociaci virových replikačních center s jadernými tělísky promyelocytární leukemie (PML NBs). PML NBs jsou jaderné multiproteinové domény, které se podílejí na regulaci vrozené imunity, a kromě toho mají i přímou restrikční aktivitu vůči některým virům. Cílem této práce bylo přispět k odhalení role replikace BKPyV v indukci vrozené imunity a asociace jeho genomů s PML NBs. Proto byl v dané práci připraven mutantní replikačně-defektní BKPyV. Odpověď vrozené imunity buněk vůči mutantnímu viru byla studována kvantifikací exprese IFN-β (gen pro interferon β) a ISGs (geny stimulované interferonem) a analýzy fosforylace STING (stimulátor interferonových genů). Kromě toho byly nukleové kyseliny mutantního viru vizualizovány metodou FISH (fluorescenční hybridizace in situ) a dále byla jejich distribuce porovnána s lokalizací PML NBs. Výsledky dané práce ukazují, že i nereplikující se...

BK polyomavirus (BKPyV) is a pathogen that causes severe diseases in immunocompromised people. It is still not clear how cells sense infection with this virus. Based on previous studies, it can be proposed that the escape of viral and cellular DNAinto the cytosol during viral replication is a process that triggers an innate immune response in infected cells. In addition, viral replication centers are known to associate with promyelocytic leukemia nuclear bodies (PML NBs) - multi-protein domains that are involved in the regulation of innate immunity and also have direct restriction activity against certain viruses. The aim of this study was to reveal the role of BKPyV replication in the induction of innate immunity and the association of its genomes with PML NBs. For this purpose, replication-defective BKPyV was generated. The innate immunity response of cells to the mutant virus was studied by quantifying the expression of IFN-β (interferon β gene) and ISGs (interferon stimulated genes) and analyzing the phosphorylation of STING (stimulator of interferon genes). In addition, the nucleic acids of the mutant virus were visualized by FISH (fluorescence in situ hybridization) and their distribution compared with the localization of PML NBs. The results of this work demonstrate that non-replicating...