Vývoj metod pro analýzu interakce antivirotika ritonaviru s lanosterol-14- α-demethylasou patogenních kvasinek

Abstract

Ritonavir is an HIV protease inhibitor, and has been used as a part of drug cocktails for highly active antiretroviral therapy (HAART). Oropharyngeal candidiasis is one of the most common opportunistic infections among AIDS patients. The research showed that those who were treated with cocktails containing HIV protease inhibitors including ritonavir suffered from oropharyngeal candidiasis to a much lesser extent than patients who received drugs without protease inhibitors. The reason may be the fact that HIV protease inhibitors also inhibit the proteases of pathogenic yeasts, despite high Ki. Another explanation may be that some of these inhibitors block lanosterol-14-α- demethylase, a key enzyme in the biosynthesis of ergosterol, which is an important component of yeast membranes. Aim of the thesis is the isolation of the microsomal fraction of the pathogenic yeasts Candida albicans and Candida parapsilosis and optimization of methods for analysis of the inhibition of yeast lanosterol-14-α- demethylase by ritonavir. Key words: ritonavir, Candida albicans, Candida parapsilosis, lanosterol-14-α- demethylase, microsomal fraction

Ritonavir je inhibitor proteasy HIV a byl používán jako součást lékových koktejlů pro vysoce aktivní antivirovou terapii (HAART). Orofaryngeální kandidóza je jednou z nejčastějších oportunních infekcí u pacientů trpících AIDS. Ukázalo se, že pokud byli léčeni koktejly obsahujícími inhibitory proteasy HIV včetně ritonaviru, trpěli orofaryngeální kandiózou v mnohem menší míře než pacienti, jimž byly podávány léky bez proteasových inhibitorů. Důvodem může být fakt, že inhibitory proteasy HIV inhibují, byť s vysokým Ki, taktéž proteasy patogenních kvasinek. Jiným vysvětlením může být, že některé z těchto inhibitorů blokují lanosterol-14-α-demethylasu, klíčový enzym biosyntézy ergosterolu, který je důležitou součástí kvasinkových membrán. Obsahem práce je izolace mikrosomální frakce patogenních kvasinek Candida albicans a Candida parapsilosis a optimalizace metod pro analýzu inhibice kvasinkové lanosterol-14-α-demethylasy ritonavirem. Klíčová slova: ritonavir, Candida albicans, Candida parapsilosis, lanosterol-14-α- demethylasa, mikrosomální frakce