Charakterizace mutantů huseníčku psbo1 a psbo2

Abstract

The PsbO protein is necessary for the function of the electron-transport chain of the thylakoid membrane in higher plants. In most of the angiosperms, including Arabidopsis thaliana, this protein has two isoforms termed as PsbO1 and PsbO2. Many authors tried to reveal the fundamental difference between the PsbO1 and PsbO2 with the help of the mutant lines which lack one of the isoforms. The problem is that the mutants in psbO isoforms do not possess the same level of PsbO as WT does. So we made psbo1isoL mutants. These lines contain only one isoform but their level of the whole PsbO is comparable to the level of the whole PsbO of WT. Results from these experiments suggest that if a psbo1isoL plant has the same amount of PsbO as WT does, there is no observable phenotype difference. Thus we were not able to identify, in the usual cultivation conditions, if there are any functional differences between PsbO1 and PsbO2 Following the above mentioned results, we would like to know conditions (if there are any) in which T-DNA insertion mutants psbo2 (respectively psbo2cr which are made with the use of the CRISPR/Cas9), which have only PsbO1 isoform, could be phenotypically distinguished from WT. With the use of usual cultivation conditions, we are unable to tell apart the psbo2 and psbo2cr from WT by the...

Protein PsbO je nezbytný pro fungování elektron-transportního řetězce v tylakoidních membránách vyšších rostlin. Ve většině krytosemenných rostlin, včetně Arabidopsis thaliana, má tento protein dvě izoformy, PsbO1 a PsbO2. Řada autorů se snažila za pomoci mutantních liniích, které postrádájí jednu či druhou izoformu, odhalit podstatu rozdílnosti PsbO1 a PsbO2. Problémem je, že mutanti v izoformách psbO nemají shodné množství celkového PsbO jako má WT. Vytvořili jsme tak rostliny psbo1isoL. Tyto linie obsahují pouze izoformu PsbO2, avšak v množství, jež je srovnatelné s hladinou PsbO ve WT. Výsledky těchto experimentů naznačují, že pokud má psbo1isoL stejnou hladinu PsbO jako WT, nelze u nich pozorovat fenotypový rozdíl. Za běžných podmínek kultivace jsme tak nebyli schopni určit, zda je mezi PsbO1 a PsbO2 funkční rozdíl. V návaznosti na výše zmíněné výsledky bychom také rádi znali podmínky (pokud takové jsou), za kterých se fenotypově odlišují T-DNA inzerční mutanti psbo2 (respektive psbo2cr, připravení metodou CRISPR/Cas9), mající pouze izoformu PsbO1, od WT. Za běžných podmínek totiž nelze na základě fenotypu psbo2 a psbo2cr od WT rozeznat. Z literatury nám byla známa jediná kultivační metoda, kdy autoři byly schopni odlišit psbo2 od WT. Touto metodou byla specifická hydroponická kultivace....