Vliv enzymu ADAR1 na životní cyklus viru hepatitidy typu C

Abstract

Hepatitis C virus (HCV) is a virus of the family Flaviviridae whose genome consists of ,,+RNA" molecule. It causes the disease hepatitis Cepatitida typu C, which affects tens of millions of people worldwide. Although there is an effective treatment for this type of hepatitis, a preventive vaccine against the HCV virus has not yet been developed. Several ambigious works focused on the relationship between HCV and the enzyme adenosine deaminase acting on double-stranded RNA 1 (ADAR1) were published in the past. This dimeric double-stranded RNA binding enzyme is a part of innate immunity and causes catalytic conversion of adenosine to inosine, which is recognized by cellular mechanisms as guanine, which ultimately leads to mutations in the affected dsRNA molecule. The works published so far attribute an antiviral function to the ADAR1 enzyme in the context of HCV infection. However, vectors containing the entire HCV genome were not used in these works, and a cell line with deletion od the ADAR1 gene has never been used so far. The actual relationship between the ADAR1 enzyme and the HCV virus has not yet been reliably verified. The aim of this thesis was to gain a deeper understanding of the relationship between the HCV virus and the ADAR1 enzyme. For this task, HCV permissive Huh7.5 cell lines with...

Virus hepatitidy typu C (dále jen HCV) je virus z čeledi Flaviviridae, jehož genom tvoří ,,+ RNA". Způsobuje onemocnění hepatitida typu C, kterým celosvětově trpí desítky milionů lidí. Ačkoli existuje léčba tohoto typu hepatitidy, nebyla dosud vyvinuta preventivní vakcína proti viru HCV. V minulosti byly publikovány nejednoznačné práce zabývající se vztahem HCV a enzymu deaminasy adenosinu účinkující na dvouvláknové RNA 1 (dále ADAR1). Tento dimerický, dvouvláknovou RNA vážící enzym je součástí vrozené imunity a svou enzymatickou aktivitou konvertuje adenosin na inosin, který je buněčnými mechanismy rozpoznáván jako guanin, což vede ve výsledku k mutacím v zasažené dsRNA molekule. Dosud publikované práce připisují enzymu ADAR1 v kontextu infekce virem HCV antivirální funkci. V těchto pracích ovšem nebyly použity vektory obsahující celý genom HCV a dosud také nebyla nikdy použita buněčná linie s delecí genu pro enzym ADAR1. Skutečný vztah enzymu ADAR1 a viru HCV tedy nebyl zatím spolehlivě ověřen. A právě pokus o hlubší porozumění vztahu viru HCV a enzymu ADAR1 byl cílem této diplomové práce. Pro tento úkol byly připraveny HCV permisivní buněčné linie Huh7.5 s delecí genu pro ADAR1. In vitro transkripcí plasmidu JFH1 obsahujícího kompletní genom HCV a následnou transfekcí této virové RNA byly...