Vliv deadenylázy Ccr4 na regulaci buněčného cyklu v kvasinkových koloniích

Abstract

Regulace buněčných procesů je pro přežívání kvasinkových buněk naprosto klíčová. Na mnohých regulacích se účastní CCR4-Not komplex, což je vysoce konzervovaný proteinový komplex nacházející se v eukaryotických buňkách od kvasinek až po savce. V této práci se zabývám především vlivem podjednotky Ccr4 na přežívání buněk ve stárnoucí kolonii kvasinek Saccharomyces cerevisiae zejména v souvislosti s regulací buněčného cyklu. Ccr4 je deadenyláza, jejíž funkcí je štěpení poly(A) konce mRNA, a tím zkracování životnosti mRNA. To je důležité během přísně regulovaných buněčných procesů, kdy je nutné, aby k expresi určitých genů docházelo jen v určitém čase. Kvasinka Saccharomyces cerevisiae BY 4742 je haploidní kmen, na němž je možné jednoduše vytvořit delece vybraných genů. V této diplomové práci jsem se zaměřila na výzkum kmene s delecí CCR4 a zároveň delecemi dalších genů ovlivňujících buněčný cyklus. Porovnáním fenotypu těchto klonů s rodičovským kmenem je možné určit změny ve fenotypu způsobené těmito delecemi a jejich vliv na přežívání buněk. Klíčová slova: regulace buněčných procesů, CCR4-Not komplex, Ccr4 podjednotka, buněčný cyklus, kvasinka, Saccharomyces cerevisiae, delece genů

Regulation of cellular processes is of key importance for survival of cells. Many regulations are mediated by the CCR4-Not complex, a highly conserved protein complex, which is present in eucaryotic cells, from yeast to mammals. In this work I study mostly the role of the Ccr4 subunit on yeast survival in the aging colony of Saccharomyces cerevisiae, mainly during cell cycle progression. Ccr4 si a deadenylase, and its main function is cleavage of poly(A) tail of mRNA molecules, and by doing so, shortening the mRNA life-time. It is very important during strictly regulated cellular processes, because it is essential that gene expression of specific genes happens only at specific time. Saccharomyces cerevisiae BY 4742 is a haploid yeast strain, which can easily be used for making deletion mutants in specific genes. In this diploma thesis I focus on studying a deletion mutant of CCR4, along with deletion of other genes, which influence yeast cell cycle. By comparing the phenotype of these mutants with wild type, it is possible to identify changes in phenotype, caused by these deletions, and their influence on yeast cell survival. Key words: cell processes regulation, CCR4-Not complex, Ccr4 subunit, cell cycle, yeast, Saccharomyces cerevisiae, gene deletion