Purifikace a charakterizace vybrané lidské mikrosomální reduktasy

Abstract

Oblast lidských jaterních mikrosomálních reduktas není ještě ani zdaleka prozkoumána. Purifikace a charakterizace dosud nepopsaných enzymů je důležitým krokem k dokončení tohoto úkolu. V mé práci je popsána separace a purifikace těchto reduktas s využitím hydrofobně- interakční chromatografie na nízkotlakém chromatografickém přístroji ÄKTA purifier. Použity byly dvě kolony s různým substrátem, Fenyl sepharosa (low sub) a Oktyl sepharosa. Podmínky separace byly v obou případech nastaveny shodně. Výsledky získané inkubací jednotlivých frakcí a následným měřením na HPLC jednoznačně prokázaly rozdíly mezi oběma kolonami a jejich substráty. Nelze ovšem jednoznačně určit, která kolona je pro purifikaci vhodnější, protože stále zbývá velký prostor pro úpravu a optimalizaci purifikačních podmínek.

Area of human liver microsomal reductases hasn't been fully explored yet. Purification and characterization of still undescribed enzymes is an important step in finishing of this task. There is separation and purification of this reductases described in my work, with usage of hydrophobic interaction chromatography on low pressure chromatography instrument ÄKTA purifier. There were two columns with different substrates used, Phenyl sepharose (low sub) and Octyl sepharose. Separation conditions were the same in both cases. Results obtained by incubation of fractions and measurement on HPLC showed significant differences between both columns and their substrates. But it isn't possible to determine, which column is better for purification, because big area still remain for adjustment and optimization of purification conditions.