Kapilární elektroforéza v analýze bioflavonoidů a fytofarmak

Abstract

A method based on capilllary zone electrophoresis (CZE) with UV detection was developed for simultaneous separation and determination of bioflavonoids hesperidin and diosmin. The analysis was performed in a fused silica capillary with effective lenght 60 cm and 50 μm I.D. UV detection was used at 207 nm. The optimum separation conditions were found out in this work. Samples were loaded hydrodynamically at a pressure of 50 mbar for 20 s. The background electrolyte consisted of 10 mM phosphate, 40 mM borate buffer with 10% MeOH, 15 mM -CD (pH* 8,0) at 25 řC. The separation voltage was +20 kV. Methylparaben was chosen as an internal standard. The calibration dependences were rectilinear in the range from 0,025 to 0,4 mg/ml for hesperidin (R=0,9973) and from 0,05 to 0,8 mg/ml for diosmin (R=0,9987). The single analysis took about 15 min. The method was suitable for determining the bioflavonoids in pharmaceutical preparation Detralex capsules with RSD values 2.4 % (diosmin) and 3.1 % (hesperidin), n=6. The recoveries were from 93,09 to 102,30 % as found by the standard addition technique.

V této práci byla vyvinuta metoda kapilární zónové elektroforézy s UV detekcí pro současné stanovení a separaci dvou bioflavonoidů hesperidinu a diosminu v léčivém přípravku Detralex potahované tablety. Analýza byla provedena v křemenné kapiláře o délce 67,2 cm (efektivní délka 60 cm) a vnitřním průměru 50 μm. UV detekce byla provedena při vlnové délce 207 nm. Byly zjištěny optimální separační podmínky a složení pracovního elektrolytu. Optimální složení pufru bylo 10 mM fosfát, 40 mM borát, 10% MeOH, 15 mM - CD a pH* 8,00. Analýza probíhala za konstantní teploty 25 řC a napětí +20 kV. Jako vhodný vnitřní standard byl zvolen methylparaben. Kalibrační závislost byla lineární v rozmezí 0,025- 0,4 mg/ml (R=0,9973) pro hesperidin a 0,05-0,8 mg/ml pro diosmin (R=0,9987). LOD byl 30,6 μ/ml (hesperidin) a 421,0 μ/ml (diosmin). LOQ byl 92,9 μ/ml (hesperidin) a 127,6 μ/ml (diosmin). Byla zjištěna opakovatelnost ploch píků a migračních časů (n=6). RSD (plocha píku) je2,13 % (hesperidin) a 3,32% (diosmin); RSD (migrační čas) je u obou analytů 0,01%.