Klonování a příprava plasmidu pro expresi UDP-glykosyltransferasy z vlasovky slezové

Abstract

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Biochemical Sciences Candidate: Barbora Wengrynová Supervisor: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Title of diploma thesis: Plasmid construction for expression of UDP-glukosyltransferase from Haemonchus contortus The barber's pole worm (Haemonchus contortus), like other organisms, uses biotransformation enzymes to metabolize exogenous and endogenous substances. Important representatives of these enzymes are also UDP-glycosyltransferases, which catalyze the formation of a covalent bond between hexose activated by uridine diphosphate and the metabolized compound, thus helping to eliminate undesirable substances. Increased attention to these enzymes is due to the involvement of UDP-glycosyltransferases in the development of resistance to anthelmintics, which are used to treat hemonchosis. The study of their properties and functions can significantly help in solving resistance issues. UGTs are divided into several families and subfamilies depending on sequence similarities. This work focuses on three representatives of UGT in the Haemonchus contortus, UGT24C1, UGT365B6 a UGT368B2. The theoretical part of the diploma thesis includes knowledge about the Haemonchus contortus, hemonchosis and its treatment, biotransformation enzymes and...

Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra biochemických věd Kandidát: Barbora Wengrynová Školitel: doc. Ing. Petra Matoušková, Ph.D. Název diplomové práce: Klonování a příprava plasmidu pro expresi UDP-glykosyltransferasy z vlasovky slezové Vlasovka slezová (latinsky Haemoncus contortus), stejně jako ostatní organismy, využívá k metabolismu exogenních i endogenních látek biotransformační enzymy. Významnými zástupci těchto enzymů jsou také UDP-glykosyltransferasy (UGT), které katalyzují vznik kovalentní vazby mezi hexosou aktivovanou uridin difosfátem a metabolizovanou sloučeninou, a tím napomáhají eliminaci nežádoucích látek. Zvýšená pozornost k těmto enzymům je způsobena účastí UDP-glykosyltransferas na vzniku rezistence na anthelmintika, kterými je léčena hemonchóza. Studium jejich vlastností a funkcí je významným pomocníkem při řešení otázek rezistence. UGT se dělí do několika rodin a podrodin v závislosti na podobnostech sekvencí. Tato práce se soustředí na tři zástupce UGT u vlasovky slezové, UGT24C1, UGT365B6 a UGT368B2. Teoretická část diplomové práce zahrnuje poznatky o vlasovce slezové, hemonchóze a její léčbě, biotransformačních enzymech a z velké části zahrnuje také vysvětlení použitých metod. Cílem této práce bylo připravit plasmid se zaklonovaným genem kódující...