Vývoj UHPLC metody pro stanovení abirateronu acetátu a jeho oxidativní degradace

Abstract

Cílem této práce bylo vyvinout a validovat metodu UHPLC pro stanovení farmaceuticky aktivní látky abirateronu acetátu v jeho práškové formě a provést nucenou degradaci pomocí peroxidu vodíku a zvýšené teploty. Kvůli nízké rozpustnosti abirateronu acetátu ve vodě, byla jako rozpouštědlo použita směs acetonitrilu a vody v poměru 1:1. Optimalizovaná separace probíhala na koloně Acquity CSH PHENYL-HEXYL (1,7 µm, 100 × 2,1 mm), jejíž teplota byla 45 řC, mobilní fáze se skládala z acetonitrilu a 0,1 % vodného roztoku kyseliny mravenčí a průtok činil 0,3 ml/min, dávkovaný objem činil 1 µl a byla použita gradientová eluce. Byl použit UV/VIS absorpční detektor s diodovým polem při vlnové délce 2665 nm a kvadrupólový hmotnostní detektor. Při validaci metody se testovala opakovatelnost, výtěžnost a meze detekce a stanovitelnosti. Také byla stanovena kalibrační závislost v rozmezí koncentrací 0,1 - 1∙10-4 mg/ml. Nucená degradace byla provedena na dvou sadách vzorků. K jedné sadě byl přidán 0,3 % peroxid vodíku. Obě sady vzorků následně byly skladovány za laboratorních podmínek a v degradační komoře, která byla nastavena na 50 řC po 1, 2 a 3 dny. Abirateron acetát vykazoval mírnou míru degradace bez přidání peroxidu vodíku jak za laboratorních podmínek, tak při zvýšené teplotě. Vzorky, ke kterým byl přidán 0,3...

Aim of this thesis was to develop and validate a method for determination of pharmaceutical active substance abiraterone acetate for UHPLC and also to perform forced degradation with 0,3 % hydrogen peroxide and elevated temperatures. Because of poor solubility of abiraterone acetate in water, mixture of acetonitrile of water in ratio of 1:1 was chosen as solvent. Opimized separation was performer on the column Acquity CSH PHENYL-HEXYL (1.7 µm, 100 × 2.1 mm) and its temperature was 45 řC. Mobile phaze was composed of acetonitrile and 0.1 % aqueous solution of formic acid, flow of mobile phase was 0,3 ml/min, sample injection volume was 1 µl and gradient elution was used. UV/VIS detector with diode array was used at the 265 nm wavelenght. Quadrupole mass detector was used as well. For validation of the method repeatability, recovery and limits of detection and quantitation were tested. Calibration dependence was tested in the concentration in range of 0.1-1∙10-4 mg/ml. Forced degradation was carried out on two sets of samples. Hydrogen peroxide of 0.3 % mass concentration was added to one set. Both of the sets were exposed to laboratory temperature and to temperature o 50 řC for 1, 2, 3 days. Abiraterone acetate exhibited small extent of degradation without hydrogen peroxide in laboratory conditions...