Molekulárně biologická analýza feochromocytomu a paragangliomu

Abstract

Předkládaná práce shrnuje výsledky výzkumu, který se zabývá relativně vzácnými neuroendokrinními nádory - feochromocytomem a paragangliomem (PHEO/PGL). Tyto nádory mohou vznikat díky dědičné genetické predispozici. Zpočátku své práce jsem se proto zaměřil na genetické vyšetření pacientů s PHEO/PGL. Byly zavedeny metody denaturační gradientové gelové elektroforézy, sekvenování dle Sangera, multiplex ligation probe amplification pro diagnostiku změn nejdříve v genech SDHD, SDHB a RET. Postupně se rozšiřoval (a stále i rozšiřuje) počet vyšetřovaných genů. V současné době metodou next generation sequencing vyšetřujeme následující geny: ATRX, BRAF, CDH1, CDKN2A, CDKN2B, FGFR1, FH, FHIT, GNAS, HIF2A (EPAS1), H-RAS, IDH1, IDH2, KIF1Bß, KMT2D, K-RAS, MAML3, MAX, MDH2, MET, NF1, NGFR, N-RAS, PHD2/EGLN1, RET, SDHA, SDHAF2, SDHB, SDHC, SDHD, TERT, TMEM 127, TP53 a VHL. Výskyt genových variant v uvedených genech (23%) se u českých pacientů s FEO/PGL se liší v porovnání s některými zahraničními studiemi (27%, 40%). Takovéto rozmezí může být způsobeno geografickými rozdíly nebo výběrem pacientů. PHEO/PGL se většinou (75%) vyskytují v benigní formě. Pro maligní formu onemocnění svědčí výskyt chromafinní tkáně v místech, kde se obvykle nenalézá, jako jsou např. játra, plíce či kosti. V testovaném souboru pacientů...

This work summarizes the results of a research inquiring into relatively rare neuroendocrine tumors - pheochromocytomas and paragangliomas (PHEO/PGL) These tumors may arise on a hereditary genetic predisposition basis. On that account we primarily focused on a genetic examination of patients with PHEO/PGL. Methods for diagnostics of changes in SDHD, SDHB and RET genes were implemented. The number of examined genes has been (and is still being) extended. Currently we are investigating these genes: ATRX, BRAF, CDH1, CDKN2A, CDKN2B, FGFR1, FH, FHIT, GNAS, HIF2A (EPAS1), H-RAS, IDH1, IDH2, KIF1Bß, KMT2D, K-RAS, MAML3, MAX, MDH2, MET, NF1, NGFR, N-RAS, PHD2/EGLN1, RET, SDHA, SDHAF2, SDHB, SDHC, SDHD, TERT, TMEM 127, TP53 and VHL, using next generation sequencing. The number of variations of the above mentioned genes is different (23%) in Czech patients with PHEO/PGL in comparison with some foreign studies (27%, 40%). This may be caused by geographical influences or selection of patients. PHEO/PGL occur mainly (75%) in a benign form. A malignant form may be indicated by the presence of chromaffin tissue in locations where these tumors do not usually occur - liver, lungs, bones. In our study we focused on characteristics indicating the malignancy, for example, the lower age of patients with the first...