Analýza proteinů a jejich změn v biologických tkáních

Abstract

(CZ) Proteiny jsou důležité biologicky aktivní látky organismu, jejich kvalitativní i kvantitativní složení rozhoduje o funkcích živého organismu. Analýzy proteinů v biologickém materiálu jsou významnou součástí biologického a lékařského výzkumu. Tato dizertace je věnována optimalizaci přípravy vzorků - biologického materiálu, a to zpracování vzorků v preanalytické fázi a jejich přípravě pro vlastní analýzy a zavádění nových postupů v jejich přípravě pro příslušné analýzy. U jednotlivých biologických materiálů byly vždy optimalizovány podmínky použitých analytických metod jednorozměrné a dvourozměrné gelové elektroforézy a hmotnostní spektrometrie. Získané výsledky byly statisticky zpracovány a navrženy další možné přístupy k výzkumu zmíněných problematik. Hlavním studovaným biologickým materiálem byla lidská slina a to s ohledem na orální zdraví. Byla provedena srovnávací studie vzorků lidské sliny, která byla získána od lidí se sanovanou (ošetřenou) denticí a lidí se zdravou denticí. Bylo studováno složení sedimentu (část vzorku celkové sliny získán centrifugací) ve vztahu k zubnímu kazu. Byly nalezeny odlišné exprese identifikovaných proteinů ve sledovaných skupinách lidí se sanovanou a zdravou denticí. Pomocí přístupu label-free kvantifikace byly prokázány rozdíly v proteinovém zastoupení ve...

(EN) Proteins are the important biologically active substances for the organism, their qualitative and quantitative composition determines thein function in the organism. Protein analysis in biological material is an important part of biological and medical research. This dissertation is focused on the optimalization of sample preparation - the biological materials - namely the pre-analytical phase of sample processing and their preparation for their own analases and also introducing new procedures in theie praparation. The conditions of individual analysis approaches were always optimized by means of one- dimensional and two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry. The obtained results were statistically evaluated and other possible approaches to futher research were outlined. The main biological material studied was human saliva with regard to oral health. Comparative study of human saliva was performed (human saliva obtained from caries-free and caries-susceptible people). The saliva composition of individual fractions was investigated with regard to oral health. The study was carried out to compare differences in the abundances of proteins in the saliva of caries-free and caries-susceptible persons, based on label-free mass spectrometry quantification, and to perform a gender...