Kvantifikace prokalcitoninu v lidském séru pomocí afinitních nosičů a hmotnostní spektrometrie

Abstract

Sepse je celosvětově rozsáhlé akutní onemocnění vyvolané nepřiměřenou reakcí imunitního systému na přítomnost patogenu v těle pacienta. Rychlá a správná diagnostika sepse umožňuje lékařům nasadit vhodnou léčbu, na kreré závisí pacientův život. Jako její specifický ukazatel se v klinické diagnostice používá protein prokalcitonin (PCT). Koncentrace PCT v krevním oběhu se při sepsi zvýší až tisícinásobně během krátkého časového úseku. Míra závažnosti sepse koreluje se zvyšující se koncentrací PCT. Všechny metody detekce prokalcitoninu v klinických laboratořích vycházejí z měření interakce PCT s protilátkou. Koncentrace prokalcitoninu je následně stanovena metodou kalibrační křivky. U metod využívaných v klinické praxi může dojít k nespecifickým interakcím použité protilátky s biomolekulami přítomnými ve vzorku. Nespecifické interakce mohou zkreslovat laboratorní výsledky. Další nevýhodou je potřeba specializovaných přístrojů pro detekci prokalcitoninu. Díky svým vlastnostem by mohla hmotnostní spektrometrie představovat vhodnou alternativní nebo doplňkovou metodu při kvantifikaci PCT. Cílem této diplomové práce bylo in situ nabohacení PCT na povrchově upravených afinitních nosičích s imobilizovanou protilátkou, které jsou kompatibilní s hmotnostní spektrometrií s laserovou ionizací/desorpcí za...

Sepsis is a worldwide health condition. It is caused by disproportionatly large immunity system response for patogene presence. Fast and accurate diagnosis of sepsis can make difference between life and death. For clinical diagnosis of sepsis is used serum protein procalcitonin (PCT) as biomarker. Procalcitonin concentration level in patient bloodstream increases up to thousand times in short time period. Severity of sepsis can be determined by correlation with its concentration in bloodstream. To determine PCT level in patient bloodstream a broad variety of specialized instrument is used. All methods have same principle of measurement - PCT-antibody interaction. Procalcitonin level is then quantified by calibration curve method. During these measurements non-specific protein-antibody interactions can occur and distort the quantification of PCT level. Mass spectrometry due to its properties comes into consideration as an alternative method, that can be used for PCT determination. Aim of this diploma thesis was in situ enrichment of PCT on surface modified affinity carriers with immobilized antibody against PCT. These carriers are compatible with matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry. Mass spectrometry provides mass spectrum, where PCT and other signals...