VÝVOJ UHPLC-MS/MS METODY KE STANOVENÍ NILOTINIBU V KRYSÍM SÉRU

Abstract

This bachelor thesis aimed to develop a UHPLC-MS/MS method for the determination of nilotinib in rat serum. The developed UHPLC-MS/MS method was used to monitor the pharmacokinetic release of the active substance in a rat model organism in a project focused on the formulation of a tablet containing nilotinib with a slower release than before. The optimal conditions of the method were as follows. Chromatographic column Acquity UPLC BEH PHENYL 100x2.1 mm, 1.7 μm from Waters. The mobile phase consisted of methanol and distilled water, both with the addition of 0.1% formic acid using gradient elution. The flow rate of the mobile phase was 0.3 mL/min, the temperature in an autosampler 15 řC, the column temperature 40 řC, the analysis time 6.5 minutes, and the injection volume 2 μl. The MRM transition monitored for nilotinib was: 530.2 → 289.10 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -20 V) and for nilotinib D6: 536.2 → 295.15 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -14 V). The setting of the ion source was as follows: nebulizing gas flow 3 L/min; drying gas flow 10 L/min; source temperature 300 řC; desolvation capillary temperature 250 řC. The method was partially validated. The coefficient of determination 1.0000 shows the excellent linearity of the method. The accuracy, expressed as a relative error, was up to 20 %. The...

Cílem této bakalářské práce bylo vyvinout UHPLC-MS/MS metodu ke stanovení nilotinibu v krysím séru. Tato UHPLC-MS/MS metoda byla následně použita ke sledování farmakokinetického průběhu uvolňování účinné látky v modelovém organismu - krysa v rámci projektu zaměřeném na formulační vývoj tablety obsahující nilotinib s pomalejším uvolňováním než doposud. Optimální nastavení metody bylo následující. Chromatografická kolona Acquity UPLC BEH PHENYL 100x2,1 mm, 1,7 μm od firmy Waters. Mobilní fáze se skládala z methanolu a destilované vody, obojí s přídavkem 0,1% kyseliny mravenčí při použití gradientové eluce. Průtok mobilní fáze byl 0,3 ml/min, teplota na dávkovači 15 řC, teplota kolony 40 řC, doba analýzy 6,5 minuty a objem nástřiku 2 μl. Byl sledován MRM přechod pro nilotinib: 530,2 → 289,10 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -20 V) a pro nilotinib D6: 536,2 → 295,15 (Q1 = -26 V; CE = -31 V; Q3 = -14 V). Nastavení iontového zdroje bylo následující: průtok nebulizačního plynu 3 l/min; průtok sušícího plynu 10 l/min; teplota zdroje 300 řC; teplota desolvatační kapiláry 250 řC. Metoda byla částečně validována. Koeficient determinace 1,0000 ukazuje výbornou linearitu metody. Správnost, vyjádřená relativní chybou, byla do 20 %. Přesnost, vyjádřená pomocí RSD, byla do 9 %. Všechny hodnoty splňují validační...