Využití kapilární elektroforézy při analýze sacharidové složky glykopeptidů

Abstract

The aim of this thesis was the development of the method for the determination of eight monosaccharides commonly found in glycoproteins by capillary electrophoresis. Namely, it was determination of glucose, galactose mannose, N-acetylglucosamine, N-acetylgalactosamine, fucose, N-acetylneuraminic acid and xylose. Total length of silica capillary with inner diameter of 10 m was 50.0 cm and effective length was 35.0 cm. Background electrolyte was compound of sodium hydroxide of 50 mmol/l concentration, disodium phosphate of 22.5 mmol/l concentration and cetyltrimethylamoniumbromide of 0.2 mmol/l concentration. Samples were injected hydrodynamically with pressure of 5 kPa for 70 s, driving voltage was -30 kV and the pressure of 270 kPa was applied to the outlet vial during the separation; capacitively coupled contactless conductivity detector was used to detect the analytes. The limits of detection were between 5 and 7 mg/l and the limits of quantification were between 16 and 22 mg/l. Repeatability of peak areas and migration times related to 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethanesulfonic acid as an internal standard showed values of relative standard deviation lower than 4 %. Conditions for hydrolysis of oligosaccharides to monosaccharides were determined as 4M hydrochloric acid and 100 řC, hydrolysis...

Cílem této diplomové práce byl vývoj metody pro stanovení osmi monosacharidů nejčastěji se vyskytujících v glykoproteinech pomocí kapilární elektroforézy. Konkrétně se jednalo o stanovení glukosy, galaktosy, manosy, N-acetylglukosaminu, N-acetylgalaktosaminu, fukosy, N-acetylneuraminové kyseliny a xylosy. Celková délka křemenné kapiláry s vnitřním průměrem 10 m byla 50,0 cm a efektivní délka 35,0 cm. Základním elektrolytem byla směs hydroxidu sodného o koncentraci 50 mmol/l, hydrogenfosforečnanu sodného o koncentraci 22,5 mmol/l a cetyltrimethylamoniumbromidu o koncentraci 0,2 mmol/l. Vzorky byly dávkovány hydrodynamicky tlakem 5 kPa po dobu 70 s, separace probíhala při napětí -30 kV a tlaku 270 kPa vkládaném na výstupní vialku a detekce analytů probíhala pomocí bezkontaktního vodivostního detektoru. Meze detekce se pohybovaly v rozmezí od 5 do 7 mg/l a meze stanovitelnosti od 16 do 22 mg/l. Opakovatelnost ploch píků a jejich migračních časů vztažených na vnitřní standard kyseliny 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethansulfonové poskytla hodnoty relativních směrodatných odchylek menších než 4 %. Nakonec byly určeny vhodné podmínky pro hydrolýzu oligosacharidů na monosacharidy před jejich separací. Hydrolýza probíhala v 4M kyselině chlorovodíkové při 100 řC v blokové lázni, hydrolýza netrvala déle než...