Analýza vybraných pterinů a jejich extraktů z integumentu Pyrrhocoris apterus metodou HPLC-MS/MS

Abstract

Tato diplomová práce byla zaměřena na vývoj separační metody pro kvalitativní analýzu dvanácti vybraných pterinových derivátů pomocí hydrofilní interakční kapalinové chromatografie (HILIC) ve spojení s tandemovou hmotnostní detekcí. Pro separaci byly použity dvě zwiterionické kolony, kde na silikagelovém nosiči byl navázán buď sulfobetainový ligand (kolona ZIC-HILIC) nebo fosforylcholin jako ligand (kolona ZIC- cHILIC). Optimalizace separačních podmínek byla vedena s cílem zajistit dostatečnou separaci analytů v akceptovatelném čase. Byl sledován vliv obsahu organického modifikátoru a vliv koncentrace soli a jejího pH ve vodné složce mobilní fáze na separaci analytů. Optimalizované separační podmínky (kolona ZIC-HILIC, mobilní fáze o složení 83/17 (v/v) acetonitril/10 mM octan amonný, pH 6,8) byly aplikovány pro analýzu extraktů z integumentu ploštice Pyrrhocoris apterus. Extrakty byly získány pomocí pěti rozdílných extrakčních činidel, konkrétně acetonitrilu, methanolu, dimethylsulfoxidu (DMSO) a dvou typů tzv. deep eutectic solvents obsahujících směs cholinchloridu a mléčné kyseliny (DES 1) a směs cholinchloridu a ethylenglykolu (DES 2). Jako nejúčinnější extrakční činidlo se, s celkovým počtem osmi extrahovaných derivátů z dvanácti studovaných, ukázal být DMSO, a naopak nejméně vhodnou extrakční...

This diploma thesis was focused on the development of a separation method for qualitative analysis of twelve chosen pterin derivates by hydrophilic interaction liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry detection. Two silica gel-based columns with different ligands attached were used for the chromatographic separation - a ZIC-HILIC column containing sulfobetaine as a ligand and a ZIC-cHILIC column containing phosphorylcholine as a ligand. The optimizing procedure was performed to achieve sufficient separation of the analytes in an acceptable time. Therefore, the effect of the amount of organic modifier in mobile phases and salt concentrations and the pH of the aqueous phase on the separation of pterin derivatives was studied. Under the optimized separation conditions (column ZIC-HILIC, mobile phase composition 83/17 (v/v) acetonitrile/10 mM ammonium acetate, pH 6.8) the method was used for the analysis of extracts from the integument of Pyrrhocoris apterus. The extracts were obtained using five different extraction systems, namely acetonitrile, methanol, dimethyl sulfoxide (DMSO) and two types of so-called deep eutectic solvents containing a mixture of choline chloride and lactic acid (DES 1) and a mixture of choline chloride and ethylene glycol (DES 2). DMSO was shown to be the...