HPLC separace fenolických látek z rostlinného materiálu

Abstract

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Analytical Chemistry Candidate: Jana Majerčíková Supervisor: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Title of the diploma thesis: HPLC separation of phenolic substances in plant material This diploma thesis is focused on development and optimization HPLC-DAD method for determination of 17 phenolic compounds (gallic acid, protocatechuic acid, 4-aminobenzoic acid, chlorogenic acid, catechin, caffeic acid, epicatechin, vanillin, p-coumaric acid, ferulic acid, salicylic acid, rutin, o-coumaric acid, quercitrin, myricetin, quercetin and kaempferol) in apricot variety Betynka. In the process of optimization several types of stationary phase and gradients of mobile phase were tested. For the analysis of real samples guard column Security GuardTM Polar C18 (4 x 2.0 mm, 3 μm) and column Luna Omega Polar (150 mm x 2.1 x 3 μm) were selected. As mobile phase the mixture of ultrapure water acidified with the acetic acid to pH 2.8 and acetonitrile was used. For the analysis the gradient elution with initial isocratic step was used, total analysis time was 17 minutes. The flow rate was 0.6 ml/min and the injection volume 1 μl. The detection was performed by DAD spectrophotometric detector at wavelengths of 254, 260, 280 and 320 nm. Validate...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie Kandidát: Jana Majerčíková Školitel: doc. PharmDr. Hana Sklenářová, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC separace fenolických látek z rostlinného materiálu Tato diplomová práce je zaměřena na vývoj a optimalizaci HPLC-DAD metody pro stanovení 17 fenolických látek (kyselina gallová, kyselina protokatechinová, kyselina 4- aminobenzoová, kyselina chlorogenová, katechin, kyselina kávová, epikatechin, vanilin, kyselina p-kumarová, kyselina ferulová, kyselina salicylová, rutin, kyselina o-kumarová, kvercitrin, myricetin, kvercetin a kaempferol) v odrůdě meruněk Betynka. V rámci optimalizace bylo provedeno testování několika typů stacionárních fází a gradientů mobilní fáze. Pro měření vzorků byla použita předkolona Security GuardTM Polar C18 (4 x 2,0 mm, 3 μm) a kolona Luna Omega Polar (150 mm x 2,1 x 3 μm). Mobilní fází byla zvolena ultračistá voda okyselená kyselinou octovou na pH 2,8 a acetonitril. Byla používána gradientová eluce s počátečním izokratickým úsekem, celková analýza trvala 17 minut. Nastřikovaný objem byl 1 μl a průtoková rychlost 0,6 ml/min. Látky byly detekovány pomocí DAD spektrofotometrického detektoru při vlnových délkách 254, 260, 280 a 320 nm. Validovaná metoda HPLC-DAD byla využita pro srovnání...