Hepatocyte ROCK1 kinase activity incites liver inflammation in murine non-alcoholic fatty liver disease

Abstract

Charles University in Prague, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové, Department of Biological and Medical Sciences Candidate: Mgr. Ester Dohnalkova Consultant: prof. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D. Title of Thesis: Hepatocyte ROCK1 kinase activity incites liver inflammation in murine non- alcoholic fatty liver disease Background: Rho-associated protein kinase 1 (ROCK1) activity has been previously implicated in lipotoxicity-induced extracellular vesicle (EV) release from hepatocytes. In turn, lipotoxic hepatocyte-derived EVs incite inflammatory response in monocytes and macrophages. In addition, we previously found that activated ROCK1 is a distinct histologic feature of inflammatory stage of murine and human nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). However, it is currently unknown whether activated ROCK1 may directly contribute to NAFLD pathogenesis. Therefore, we aimed to examine the effect of hepatocyte ROCK1 kinase activity on the development of inflammation in a model of murine NAFLD. Methods: To assess the role of ROCK1 in NAFLD, we have adopted an in vivo gain-of-function approach. C57BL/6J mice were injected with either: a) vehicle; b) adeno-associated virus, serotype 8 (AAV8)-packaged, TBG-driven constitutively active ROCK1 (CA-ROCK1) construct; or c) AAV8-packaged, TBG-driven kinase-dead...

Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové, Katedra biologických a lékařských věd. Školitel: doc. PharmDr. Petr Nachtigal, Ph.D., Kandidát: Mgr. Ester Dohnálková Název rigorózní práce: Hepatocyte ROCK1 kinase activity incites liver inflammation in murine non-alcoholic fatty liver disease Úvod: Již dříve bylo zjištěno, že Rho-asociovaná proteinová kináza 1 (ROCK1) se podílí na uvolňování extracelulárních vezikulů (EV) z hepatocytů vyvolaného lipotoxicitou. Lipotoxické EV uvolněné z hepatocytů vyvolávají zánětlivou odpověď v monocytech a makrofázích. Kromě toho jsme dříve zjistili, že aktivovaná ROCK1 kináza je histologickým znakem zánětlivého stadia myšího a lidského nealkoholového ztučnění jater (NAFLD). V současné době však není známo, zda aktivovaná ROCK1 kináza může přímo přispívat k patogenezi NAFLD. V naší studii jsme se zaměřili na zkoumání účinků hepatocytové ROCK1 kinázové aktivity při vývoji zánětu v myším modelu NAFLD. Metody: Pro posouzení role ROCK1 kinázy v NAFLD jsme použili in vivo model. Myším (C57BL/6J kmen) bylo injekčně podáno buď: a) vehikulum; b) AAV8-zabalený, TBG-řízený konstitutivně aktivní ROCK1 (CA-ROCK1) konstrukt; nebo c) AAV8-zabalený, TBG-řízený kinázově neaktivní ROCK1 (KD-ROCK1) konstrukt jako negativní kontrola. O dva týdny později byly myši umístěny...