Využití tkáňových linií pro toxikologii v životním prostředí

Abstract

Pět látek ze skupiny látek tzv. produktů osobní hygieny, které jsou známé svou obtížnou degradabilitou a běžnou detekcí v životním prostředí, bylo testováno z hlediska toxicity pomocí dvou rybích tkáňových liniích (RTgill-W1 a RTG-2) izolovaných ze pstruha duhového (Oncorhynchus miykiss). Testovanými látkami byli hexadecylpyridinium chlorid (HDP), chlorhexidin (CHX), octenidin (OCT), thymol (THM) a triclosan (TCS), S každou z těchto látek byl proveden test na viabilitu buněk s použitím protokolů Alamar Blue™ (AB), 5-karboxyfluorescein diacetát acetoxymethyl ester (CFDA-AM) a neutral red (NR). Výsledky byly použity pro konstrukci křivek dávka-odpověď spolu s hodnotou EC50 pro každou z těchto látek. Hodnoty EC50 se pohybovaly u RTgill-W1 od 0,51 (HDP) do 33,75 µg.ml-1 (THM) a u RTG-2 od 0,31 (HDP) do 33,37 µg.ml-1 (THM). Byl zpracován i teoretický odhad LC50 podle Tanneberger et al. (2013). U všech látek byla sledována aktivita cytochromu P450 1A pomocí 7-ethoxyresorufin-o-deethylázy (EROD), z čehož čtyři se statisticky prokázaly jako tzv. EROD pozitivní, nejvyšší odezva EROD byla naměřena u nejtoxičtější z chemikálií - HDP. Jediný TCS nevykazoval statisticky významnou aktivitu cytochromu P450 1A. Dále byl měřen oxidativní stres s fluorescenčním barvivem dichlorofluorescein (DCFH-DA), přičemž...

5 Abstract Five substances from the group of so-called personal care products, known for their low degradability and regular environmental detection, were tested for toxicity using two fish tissue lines (RTgill-W1 a RTG-2) isolated from rainbow trout (Oncorhynchus miykiss). The tested substances were hexadecylpyridinium chloride (HDP), chlorhexidine (CHX), octenidine (OCT), thymol (THM) and triclosan (TCS). A cell viability assay was performed with each of these compounds using Alamar Blue ™ (AB), 5-carboxyfluorescein diacetate acetoxymethyl ester (CFDA-AM) and neutral red (NR) protocols. The results were used to construct dose-response curves along with an EC50 value for each of these substances. The EC50 values ranged from 0,51 (HDP) to 33,75 µg.ml-1 (THM) for RTgill-W1 and from 0,31 (HDP) to 33,37 µg.ml-1 (THM) for RTG-2. The theoretical LC50 estimation was calculated according to Tanneberger et al. (2013). For all substances, cytochrome P450 1A activity was monitored using 7-ethoxyresorufin-o-deethylase (EROD), four out of five tested chemicals were statistically positive for EROD, the highest EROD response was observed for the most toxic compound - HDP. Only TCS did not show statistically significant cytochrome P450 1A activity. In addition, oxidative stress was measured with the fluorescent dye...