Vliv proteinu HBx viru hepatitidy B na aktivaci MEK1/2-ERK signalizace a inhibici IFN typu I v hepatocelulární linii Huh7

Abstract

Hepatitis B virus (HBV) infection is one of the major causes of chronic and cancerous liver disease. Elimination of HBV from chronically infected patients by recombinant interferon α (IFNα) monotherapy shows that the mechanisms of the innate immunity play an important role in suppressing viral infection. However, the mechanisms of recognition of the HBV genome and its escape from the mechanisms of natural immunity are still little known. One of the principal factors enabling the virus to escape from cellular restriction mechanisms is the HBx viral protein. HBx is a 154 amino acid pleiotropic multifunctional protein affecting transcription, signal transduction, cell cycle, protein degradation, apoptosis, and chromosomal stability in the host cell. Previous results from our laboratory have shown that activation of the MEK1/2-ERK signaling pathway in plasmacytoid dendritic cells leads to inhibition of IFNα production. The aim of my work was to determine whether HBx activates the MEK1/2-ERK pathway and thus inhibits IFN type I production also in hepatocytes. For this purpose, I monitored HBx production in the Huh7 hepatoma cell line by transfecting the bicistronic plasmid pHBx- IRES-EGFP and Western blotting. Using the same method, I monitored activation of the MEK1/2-ERK signaling pathway by ERK...

Infekce virem hepatitidy B (HBV) je jednou z hlavních příčin chronického a nádorového onemocnění jater. Eliminace HBV z chronicky infikovaných pacientů monoterapií založené na rekombinantním interferonu α (IFNα) ukazuje, že mechanizmy přirozené imunity hrají důležitou roli při potlačení virové infekce. Mechanismy rozpoznávání genomu HBV a jeho úniku před mechanismy přirozené imunity jsou však stále málo známy. Jedním z principiálních faktorů umožňujících viru uniknout před buněčnými restrikčními mechanizmy je virový protein HBx. HBx je pleiotropní multifunkční protein složený ze 154 aminokyselin ovlivňující transkripci, přenos signálu, buněčný cyklus, degradaci proteinů, apoptózu a chromozomální stabilitu v hostitelské buňce. Předchozí výsledky z naší laboratoře ukázaly, že aktivace signální dráhy MEK1/2-ERK v plasmacytoidních dendritických buňkách vede k inhibici produkce IFNα. Cílem mojí práce bylo zjistit, zdali HBx aktivuje dráhu MEK1/2-ERK a inhibuje tím produkci IFN typu I rovněž v hepatocytech. K tomu účelu jsem sledovala tvorbu HBx v hepatomové linii Huh7 pomocí transfekce bicistronického plasmidu pHBx-IRES-EGFP a metody Western blot. Stejnou metodou jsem sledovala aktivaci signální dráhy MEK1/2-ERK pomocí fosforylace kinázy ERK. Moje výsledky ukazují, že maximum exprese HBx v buňkách Huh7...